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时间:2019-08-04
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1、关于生化中的终点法中的两点法,还有种叫法是固定时间法的一些题新手上路,有哪位大侠能先容先容终点法中的两点法的原理,在生化上怎么往做两点法呀(简单回答)最基本的生化反应方法有三种,其他的都是在此基础演变而来。1。速率法,有叫动态法,仪器连续检测生化反应过程中的吸光度变化,目的是得到吸光度变化速率。酶活性的检测大多用此方法。检测底物的是下降反应,又叫负反应,例如:ALTAST等;检测天生物的是上升反应,又叫正反应,ALP。2。终点法。仪器检测生化反应某一时间点的吸光度值,目的得到反应溶液的具体吸光度值。常见的有GLU,TP,ALB等3。两点法。仪器检测生化反应两个时间点的吸光度值,第
2、二点减往第一点,得到吸光度的差值,检测底物的差值为负,检测天生物的差值为正,例如,中生试剂的肌酐项目Cr。生化仪无论半自动或全自动,都有实验参数设置,只要按试剂说明正确设置,再照试剂说明做实验就行了。使用分光光度计另当别论。两点法:又称为一级动力学法、固定时间法等,指在一定的反应时间内,反应速度与底物浓度的一次方成正比,即v=k[S]。由于底物在不断的消耗,因此整个反应速度在不断的减小,表现为吸光度的变化越来越小。这类反应达到平衡的时间很长,理论上可以在任意时间段进行监测,但由于血清成份复杂,反应刚启动时反应较复杂,杂反应较多,必须经过一段延迟时间才能进进稳定反应期。两点法不是什
3、么终点法中的两点法,正确地说它应该属于动态法范畴,一种带标准的动态法.新手上路,有哪位大侠能先容先容终点法中的两点法的原理,在生化上怎么往做两点法呀(简单回答)最基本的生化反应方法有三种,其他的都是在此基础演变而来。1。速率法,有叫动态法,仪器连续检测生化反应过程中的吸光度变化,目的是得到吸光度变化速率。酶活性的检测大多用此方法。检测底物的是下降反应,又叫负反应,例如:ALTAST等;检测天生物的是上升反应,又叫正反应,ALP。2。终点法。仪器检测生化反应某一时间点的吸光度值,目的得到反应溶液的具体吸光度值。常见的有GLU,TP,ALB等3。两点法。仪器检测生化反应两个时间点的吸
4、光度值,第二点减往第一点,得到吸光度的差值,检测底物的差值为负,检测天生物的差值为正,例如,中生试剂的肌酐项目Cr。生化仪无论半自动或全自动,都有实验参数设置,只要按试剂说明正确设置,再照试剂说明做实验就行了。使用分光光度计另当别论。两点法:又称为一级动力学法、固定时间法等,指在一定的反应时间内,反应速度与底物浓度的一次方成正比,即v=k[S]。由于底物在不断的消耗,因此整个反应速度在不断的减小,表现为吸光度的变化越来越小。这类反应达到平衡的时间很长,理论上可以在任意时间段进行监测,但由于血清成份复杂,反应刚启动时反应较复杂,杂反应较多,必须经过一段延迟时间才能进进稳定反应期。两
5、点法不是什么终点法中的两点法,正确地说它应该属于动态法范畴,一种带标准的动态法.二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里,用户不能修改。各种测定项目的分析参数(analysisparamete)大部分也已设计好,存于磁盘中,供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式,用户可以更改这些参数。生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道,由用户自己设定分析参数。因此必须理解各参数的确切意义。一、分析参数介绍(一)必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件,没有这些参数无法进行检测。1.试验名称试验名称(testcode)是指
6、测定项目的标示符,常以项目的英文缩写来表示。2.方法类型(也称反应模式)方法类型(assay)有终点法、两点法、连续监测法等,根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。3.反应温度一般有30℃、37℃可供选择,通常固定为37℃。4.主波长主波长(primarywavelength)是指定一个与被测物质反应产物的光吸收有关的波长。5.次波长次波长(secondarywavelength)是在使用双波长时,要指定一个与主波长、干扰物质光吸收有关的波长。6.反应方向反应方向(responsedirection)有正向反应和负向反应两种,吸光度增加为正向反应,吸光度下降为负向反应。
7、7.样品量样品量(samplingvolum)一般是2μl~35μl,以0.1μl步进,个别分析仪最少能达到1.6μl。可设置常量、减量和增量。8.第一试剂量第一试剂量(firstregengtvolum)一般是20~300μl,以1μl步进。9.第二试剂量第二试剂量(secondregengtvolum)一般也是20~300μl,以1μl步进。10.总反应容量总反应容量(totalreactingvolum)在不同的分析仪有一个不同的规定范围,一般是180~350μl,个别仪器
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