MiniBEST Plasmid Purification KitDV801A

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1、TaKaRaCode：DV801AMiniBESTPlasmidPurificationKitVer.2.0（50次量）目录内容页码●制品说明1●制品内容1●运输温度1●保存温度1●操作方法2●使用例3●注意事项3●Q&A4●制品说明本试剂盒是用于质粒（Plasmid）DNA小量纯化的试剂盒。试剂盒采用了传统的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需1小时便可完成。使用本试剂盒可从1～4ml的过夜培养的菌液中纯化得到1～20μg的高纯度质粒DNA（OD260/OD280=1.8～2.0），此质粒DNA可直接用于DNA序列分析

2、以及各种酶促反应等。●制品内容（50次量）本试剂盒分试剂Set与ColumnSet两部分。■试剂SetRNaseA1（50mg/ml）*132μlSolutionⅠ*115mlSolutionⅡ*215mlSolutionⅢ24mlRinseA28mlRinseB*324mlElutionBuffer*44ml*1RNaseA1溶液为混浊溶液，初次使用本试剂盒时，请将RNaseA1混浊液全部加入到SolutionⅠ中，均匀混合后4℃保存。*2若出现沉淀，请于37℃保温溶解，待恢复至室温后使用。*3首次使用前，请添加56ml的100%乙醇。*4ElutionBuf

3、fer组成：2.5mMTris-HCl（pH8.5）。■ColumnSetSpinColumn50支CollectionTube（2ml）50支●运输温度：室温●保存温度■试剂SetRNaseA1：-20℃保存。RNaseA1溶液为混浊溶液，初次使用本试剂盒时，请将RNaseA1混浊液全部加入到SolutionⅠ中，均匀混合后4℃保存。SolutionⅡ：室温保存。若出现沉淀，请于37℃保温溶解，待恢复至室温后使用。其他试剂：室温保存。■ColumnSet室温保存。-1-●操作方法第一次使用本试剂盒时，请将RNaseA1混浊液全部加入到SolutionⅠ中，均匀

4、混合后4℃保存。实验操作前请将SolutionⅢ置于4℃（或冰上）预冷后使用。操作流程见图1，全套操作约需1小时，详细说明如下。1.大肠杆菌的培养。从平板培养基上挑选单菌落接种至1～4ml的含有抗生素的液体培养基中，37℃过夜培养。注）培养液不宜过量，培养液过量时，会因菌量太大而溶菌不充分，纯化时会影响质粒的纯度。2.取1～4ml的过夜培养菌液，12,000rpm离心2分钟，弃上清。3.用250μl的SolutionⅠ（含RNaseA1）充分悬浮细菌沉淀。注）注意不要残留细小菌块，可以使用振荡器（Vortex）等剧烈振荡使菌体充分悬浮。4.加入250μl的Sol

5、utionⅡ轻轻地上下翻转混合5～6次，使菌体充分裂解，形成透明溶液。注）此步骤不宜超过5分钟。5.加入400μl的4℃预冷的SolutionⅢ，轻轻上下翻转混合5～6次，直至形成紧实凝集块，然后室温静置2分钟。6.室温12,000rpm离心10分钟，取上清。注）此时4℃离心不利于沉淀沉降。7.将试剂盒中的SpinColumn安置于CollectionTube上。8.将上述操作6的上清液转移至SpinColumn中，12,000rpm离心1分钟，弃滤液。9.将500μl的RinseA加入SpinColumn中，12,000rpm离心30秒钟，弃滤液。10.将70

6、0μl的RinseB加入SpinColumn中，12,000rpm离心30秒钟，弃滤液。注）请确认RinseB中已经加入了指定体积的100%乙醇。11.重复操作步骤10。12.将SpinColumn安置于新的1.5ml的离心管上，在SpinColumn膜的中央处加入60μl的灭菌蒸馏水或ElutionBuffer，室温静置1分钟。注）把灭菌蒸馏水或ElutionBuffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。13.12,000rpm离心1分钟洗脱DNA。图1.操作流程简图-2-如果实验室备有适合于SpinColumn接口的负压装置，可从上述操作步骤6以后进行以

7、下操作。7.将试剂盒中的SpinColumn插到负压装置的插口上，将上述操作步骤6的上清液转移到SpinColumn中，开启调节负压装置，缓慢吸走SpinColumn中的溶液（流速控制在1滴/秒）。8.将负压调至最大，向SpinColumn中加入500μl的RinseA，吸尽SpinColumn中溶液。9.向SpinColumn中加入700μl的RinseB，吸尽SpinColumn中溶液。注）请确认RinseB中已经加入了指定体积的100%乙醇。10.重复操作步骤9，然后从负压装置上取下SpinColumn，将其安置于试剂盒中的CollectionTube上。

8、11.12,000rpm