3种农药诱发蚕豆根尖细胞微核试验研究

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1、3种农药诱发蚕豆根尖细胞微核试验研究摘要:用蚕豆根尖微核技术研究3种农药（甲胺磷、甲基硫菌灵和盐酸吗啉胍)在正常使用浓度范围的诱变效应.结果表明,3种农药单独使用时，诱发蚕豆根尖细胞微核率与对照组相比均有不同程度的上升(P<0.01)，农药浓度与微核率呈剂量-效应关系，且盐酸吗啉胍的诱变效应大于其他2种农药.3种农药联合作用时，髙浓度组具拮抗性，中低浓度组显示协同作用，微核率与农药浓度不表现剂量-效应关系.3种农药的最佳使用浓度：甲胺磷为0.2300~0.2500g.L—1,甲基硫菌灵为0.4680~0.5260g'L_l,盐酸吗啉胍为0.0556

2、-0.0592g-L关键词:农药;蚕豆根尖;微核率;诱变活性;甲胺磷;甲基硫菌灵;盐酸吗啉胍近年来，国内学者用蚕豆根尖微核技术检测具有诱变活性的污水、化学药品、农药等.但均为诱变剂单独作用时的诱变效应.本试验利用蚕豆根尖微核技术，研究农业生产中常用农药甲胺磷、甲基硫菌灵、盐酸吗啉胍在规定使用浓度范围内，单独和联合作用时对蚕豆根尖细胞的遗传毒性,以探讨其毒理作用及是否存在拮抗或协同效应,为农业生产上安全合理使用农药和污染治理提供科学依据.1试验1.1材料(1)蚕豆■青皮蚕豆（巧cia/tih)，购于内江市种子公司.(2)农药.20%甲胺憐(Metha

3、midophos,Me)乳油，河南东方人化工农药有限责任公司出品;70%甲基硫菌灵(Thiophanate-methyl，Th)可湿性粉剂，浙江一帆化工有限公司出品；5%盐酸吗啉胍（MoroxydineHydrochloride,Mo)可溶性粉剂，威海韩孚生化农药有限公司出品.12方法按照国家环保总局2002年出版的《水和废水监测分析方法》（第四版）中“蚕豆根尖微核试验（B)，，的方法进行[1].染毒液的制备.在农药Me，Th，Mo的正常使用浓度范围，分别用蒸馏水稀释配制成7个等梯度不同质量浓度的染毒液.p(Me)分别为0.2100,0.2300,

4、0.2500,0.2700,0.2900,0.3100，0.3300g.L—WTh)分别为0.4100,0.4680，0.5260,0.5840,0.6420,0.7000,0.7580g.L—1;p(Mo)分别为0.0556，0.0592，0.0628,0.0664，0.0700,0.0736,0.0772g-L染毒试验.选胚根生长良好的蚕豆,分别取6~8粒放人农药的各个浓度组中染毒.染毒时间分别为4,8h，以蒸馏水为对照组.首先进行3种农药单独作用时的染毒试验,其次进行3种农药联合作用的染毒试验.联合染毒试验的设置参照文献[6]的方法进行•根据

5、第1次染毒试验，确定使用时每种农药的高浓度h(highconcentrationgroups)、中间浓度m(middleconcentrationgroups)和低浓度1(lowconcentrationgroups).甲胺憐:phMe=0.3100g-L'1,p,nMe=0.2700g-L'1,p1Me=0.2300g-L'1；甲基硫菌灵:phl1l=0.7000g.L—1,〜Th=0.5840g.L—1,=0.4680g.L—';盐酸吗啉胍:PhM。=0.0736g.L'PmMo=0.0664g-L1,^=0.059•联合作用的染毒试验设计见表

6、1.染毒后用蒸馏水将农药洗净，置于湿棉花上恢复培养24h.试验重复2次.以上试验温度均为23~25t.表13种农药联合诱导蚕豆根尖细胞微核的试验设计Tab.1Experimentaldesignformutatingmicronucleusroot-tipcellsofViciafababy3pesticidestogether编号分组编号分组编号分组编号分组1PhMcPhTh4PmMePmTli7PlMePlTh10PhMePhThPhMo2PhMePhMu5PmMePmtAo8PlMePlMo11PmMePmThPmMu3PhThPhMo6Pr

7、aThPraMo9PlThPlMo12PlMePlTbPlMo(1)蚕豆根尖制片、镜检和统计分析.切取经处理后的各组根尖，经Camoy液固定,1mol•IT1盐酸水解,常规方法制片.每个处理组随机观察5条根尖，每个根尖在髙倍镜（10X40)下镜检1000个细胞，然后从各组观察的细胞总数中计算微核细胞千分率（MCN%e).实验结果用MCN%。的均值与对照组进行t检验,从差异的显著性判断农药对蚕豆根尖细胞的诱变效应.2试验结果2.13种农药单独作用时对蚕豆根尖细胞微核的诱变效应在显微镜下，微核是与主核分离的小核,大小为主核的1/3以下，微核着色与主核基

8、本一致，形态有圆形或不规则形等,见图1，染色体变异，见图2和图3.在农药的正常使用浓度范围内，不同浓度的3种农药单独处理蚕