实验５蚕豆根尖细胞微核检测技术

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1、实验５蚕豆根尖细胞微核检测技术一原理二目的学习蚕豆根尖细胞微核制片与检测技术，了解该技术在诱变作用检测上的应用。微核(Micronucleus,MCN)，也叫卫星核，是真核生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核是各种理化因子，如辐射，化学药剂对分裂细胞作用产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。其折光率及细胞化学反应性质与主核一样，也具有合成DNA的能力。一般认为微核是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子

2、细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。微核率的多少与和作用因子的剂量或辐射累积效应有正相关。微核测试用于辐射损伤、辐射保护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断。三材料蚕豆根尖（新鲜的固定材料）四步骤1蚕豆浸种催芽2待测液对根尖的处理3根尖细胞的恢复培养4根尖的固定5根尖的酸水解：将固定的幼根放入青霉素瓶中，用dH2O浸洗2次，除去水后加入5NHCL将幼根泡住，放入30OC水浴中水解28min左右（水解时间与水温有反相关关系），待幼根软化（同时变为半透明）即可取出，用dH2O浸洗幼根2次，5min/次

3、。6制片：将幼根放在擦净的载片上，用解剖针截下4mm左右的根尖部分，捣碎，加入1-2滴改良苯酚品红染色液，染色10分钟左右，然后加盖片，压片。7镜检：先在低倍镜下找出具微核的细胞，再转入高倍镜进行仔细观察。五作业绘出一个具微核的蚕豆根尖细胞图。附微核识别标准：1、凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核；2、小核着色与主核相当或稍浅；3、小核形态可为圆形，椭圆形，不规则形等。凡符合以上3条的小核就是微核（micronucleus,MN)微核形成机制：附：实验数据的处理和污染程度的划分将微核观察记录于表上片号镜检日期镜检者各次观察的细胞数与微核数微核数/细胞数总计微核

4、千分率（MN%o)平均值1）各测试样品（包括对照组）微核千分率（MN‰)的计算为：MN‰=某测试样点（或对照）观察到的微核数/某测试样点（或对照）观察的细胞数）MN‰在10‰以下的为基本污染10‰-18‰区间为轻度污染18‰-30‰区间为中度污染30‰以上为严重污染注：每个处理观察3个根尖，每个根尖记数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数然后平均，即为该处理的微核千分率。2）污染指数（pollutionindex)污染指数（PI)=样品实测MN‰平均值/标准水MN‰平均值PI在0-1.5区间为基本无污染1.5-2.0区间为轻度污染2.0-3.5区间为中度污染3.5以上

5、为严重污染注：1）对严重污染的水环境，监查处理时造成根尖死亡，应稀释后再做测试；2）如RT>35℃，MN本底会增高，但可经污染指数数据处理，不会影响监测结果。Inanindividualheterozygousforaparacentricinversion,thechromosomesformaninversionloopduringpairinginprophaseI.后期Ⅰ染色体桥后期Ⅰ染色体桥和染色体断片二分体时期微核倒位的细胞学特征：粗线期倒位圈；后期桥和断片；微核倒位的遗传效应：改变重组率；基因重排微核试验自70年代初产生以来的近30年的时间里,在环境物质遗

6、传毒理检测方面发挥了重要的作用。它以经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点,已成为检测染色体损害的致突变剂和环境污染物的快速初筛试验,已广泛用于筛检具有染色体损伤作用的致突变剂(Mutagens)和环境污染物(EnvironmentalPollutants)。微核(micronucleus,MN)是指位于生物细胞的细胞质中独立于主核,直径小于主核1/20～1/3,完全与主核分开的圆形或椭圆形的微小核。它可以是整条染色体,也可以是染色体断片,染色性与主核一致,其中部分微核具有DNA复制能力。微核是由于外界损害因素使染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时,染色体不能随有丝分

7、裂进入子细胞,而导致染色体丢失或断裂,从而形成一个或数个小核.微核试验的产生与发展微核试验创建于20世纪70年代初,首先由Heddle和Schmid利用啮齿类骨髓细胞建立了微核测定方法。1970年Schmid及Heddle用中国金黄地鼠观察了抗肿瘤药三亚胺醌,观察骨髓与外周血细胞学的变化。并且提出用本来无核的外周血嗜多染红细胞中MN发生率来作为微核试验的基本指标,并正式命名为MNT。此后至70年代中期,该研究小组的工作,全面奠定了MNT的理论及应用基础。经Heddle等人30多年的发展,许多国家和国际组织已将其规定为新药、食品添加剂、农药