GBT17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法.pdf

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1、GB/'r17818-1999前言饲料中维生素D的测定目前尚无国家标准和国际标准，本标准是参照美国公职分析化学家协会AOAC(1995年版)《混合饲料、预混合物和宠物食品中维生素D3液相色谱法》及瑞士罗氏药品化学有限公司维生素研究部发表的《饲料中维生素和类胡萝卜素—一现代分析方法尸用高效液相色谱法测定配合饲料和预混合饲料中维生素D3”而制定的。在技术内容上参照两法，在编写格式上依据GB/T1.1-1993《标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定》和GB/T1.4-1988《标准化工作导则化学分析方法标准编写规定

2、》。为了使饲料中维生素D3测定方法科学、准确、经济、实用，适合于我国不同实验室大量饲料样品的测定，在参照国外分析方法的基础上，增加了反相色谱测定条件。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人:陈必芳、赵小阳。.www.bzxzk.com.中华人民共和国国家标准饲料中维生素D3的测定GB/T17818-1999高效液相色谱法DeterminationofvitaminD3infeeds-High-pressureliquidchromatography1范围本标准规定了饲料

3、中维生素D3的测定一一高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素D3的测定测量范围为每千克样品中含维生素D3(胆钙化醉)的量在5001U以上。2引用标准下列标准所包含的条文.通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3方法原理用碱溶液皂化试验样品，乙醚提取未皂化的化合物，蒸发乙醚，残渣溶解于甲醇并将部分溶液注入高效液相色谱净化柱中除去干扰物，收集含维生素D

4、,淋洗液馏分，蒸发至干，溶解于正己烷中，注入高效液相色谱分析柱，用紫外检测器在264nm处测定，通过外标法计算维生素D。的含量当样品中维生素D。标示量超过每千克10000IU时，可省去高效液相色谱净化柱，试验溶液直接注入色谱分析柱分析。4试剂和材料除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682用水的规定。4，无水乙醚:无过氧化物。4.1.1过氧化物检查方法用5mi乙醚加1MI.10%碘化钾溶液，振摇Imin，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色。若加。.500淀粉指示液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使

5、用。4.1.2去除过氧化物的方法:乙醚用5%硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用蒸馏水振摇洗涤两次，重蒸，弃去首尾5%部分，收集馏出的乙醚，再检查过氧化物，应符合规定4.2乙醇4.3正己烷:重蒸馏(或光谱纯)。4.41,4一二氧六环。4.5甲醉:优级纯。一一一，，，，，，，，，，，一‘国家质量技术监督局，999一08一10批准2000一02一01实施.www.bzxzk.com.GB/T17818-19994.62,6-叔i一基对甲酚(BHT)4.7无水硫酸钠4.8氢氧化钾溶液500g/14.9抗坏血酸乙醇溶液5g/1:取。.5g抗坏血酸

6、结晶纯品溶解于4m工温热的蒸馏水中.用乙醇稀释至100mL，临用前配制。4.10氯化钠溶液100g/Lo4.11维生素D,标准济液4.11门维生素D:标准贮备液:准确称取50.0mg维生素D,(胆钙化醇)USP结晶纯品，于50mL棕色容童瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，4℃保存。该贮备液的浓度为每毫升含1mg维生素D,.4.11.2维生素D:标准工作液:准确吸取维生素D。标准贮备液(4.11.1)，用正己烷按1:100比例稀释，该标准溶液浓度为每毫升含10lSg(4001U)维生素D,o4门2酚酞指示剂乙醇溶液10g/L,4门3氮气99.9。5

7、仪器、设备5门实验室常用设备5.2圆底烧瓶，带回流冷凝器5.3恒温水浴或电热套5.4旋转蒸发器。5.5超纯水器(或全磨口玻璃蒸馏器)。5.6高效液相色谱仪(两套)，带紫外检测器6试样的制备选取有代表性的饲料样品至少500g，四分法缩减至100g,磨碎，全部通过。.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中.避光低温保存备用。7分析步骤了门试验溶液的制备7.1.1皂化称取试样，配合饲料10-20g，浓缩饲料10g,精确至。.001g。维生素预混料或复合预混料1-5g,精确至。0001g,置入250ml圆底烧瓶中，加50^60mL抗坏血酸乙醇溶液(4-9)

8、，使试样完全分散、浸湿加10ml氢氧化钾溶液(4.8),混合均匀。置于沸水浴上回流30min，不时振荡防止试祥粘附在瓶壁L，皂化结束，分别用5mL乙醇