《药残检测原理》ppt课件

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1、药物残留检测的基本原理王玉峰2013.04药物残留主要包括农药残留和兽药残留、真菌毒素。农药残留在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬菜、果品、畜产品、水产品以及土壤和水体中的现象。如滴滴涕，毒死蜱，马拉硫磷等。兽药残留是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品等)中原型药物或其代谢产物。如氯霉素，克伦特罗，硝基呋喃等。真菌毒素黄曲霉素：B1、M1、B2、M2、G1、G2桔霉素：展青霉素：玉米赤霉类：玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉烷酮其它孔雀石绿、

2、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫糖皮质激素：泼尼松龙、甲基泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松雌激素类：己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚兽药残留检测方法酶联免疫法：各种试剂盒液质质联用仪：LC-MS/MS，三重四级杆质谱仪、杂合三重四级杆(QTRAP)试纸条：微流控芯片：微生物抑制法：高效液相色谱第一部分酶联免疫技术在药残检测和病毒抗体检测中的应用酶联免疫检测的原理①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或

3、抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅定性或定量分析。优点：①灵敏度高(ppb)②操作步骤易掌握；不足：①有些试剂盒价格昂贵②易出现假阳性，导致实验

4、反复酶联免疫检测兽药残留的方法类型三种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。实例1.瘦肉精，磺胺类药残-间接竞争ELISA法(北京勤邦)在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，标品或样本中残留的克伦特罗和预包被抗原竞争抗克伦特罗的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与残留物克伦特罗负相关，根据标准曲线，得出克伦特罗残留量。抗原抗体二抗酶标二抗TMB底物瘦肉精-间接竞争ELISA法孵育+Substance+Substance+Substance加底物显色3,3’，

5、5,5’-四甲基联苯胺(TMB)TMB氧化产物加硫酸终止液后ELISA显色机理实例2.氯霉素-直接竞争ELISA法(杭州迪恩)标品或样品中的游离氯霉素与酶标记的氯霉素竞争结合酶标板微孔中固相化的抗氯霉素抗体，通过清洗洗掉未结合的酶标记氯霉素，通过添加底物显色。样品的吸光值与浓度成负相关，根据标准曲线，得出氯霉素的残留量。磺胺七合一直接竞争ELISA法(天津九鼎)酶联免疫检测兽药残留的方法类型抗体氯霉素酶标-氯霉素孵育+Substance+Substance+Substance加底物显色氯霉素-直接竞

6、争ELISA法酶联免疫检测兽药残留的方法类型实例3.硝基呋喃-间接竞争ELISA法(无锡同昕)ELISA原理类似于瘦肉精的检测，不同之处是硝基呋喃需要衍生。硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢，代谢物在组织中则能存留较长的一段时间，所以我们检测的实为硝基呋喃的代谢物。由于代谢物均为较小分子，属于半抗原，因此制备其抗体时，需要进行衍生后，免疫动物获得抗体(也有可能是单克隆抗体)。此处的衍生试剂还没有确定是否和GB中的衍生化试剂类似？抗原抗体二抗酶标二抗硝基呋喃-间接竞争ELISA法孵育+Substanc

7、e+Substance+Substance加底物显色实例4.伪狂犬病病毒(PRV)直接竞争ELISA法在酶标板微孔条上预包被PRV的抗原PRVgB，阳性对照或样本中的抗体在第一次孵育时和包被抗原特异性结合；清洗微孔后加入酶标记的抗PRVgB的单克隆抗体，第二次孵育时酶标单抗和样本中的抗体竞争吸附微孔条中的抗原。再次清洗微孔后加入底物TMB显色，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与抗体浓度负相关。即免疫成功，产生了抗体，显色的OD630值小于阴性对照。抗典型性猪流感病毒血清，抗口蹄疫病毒血清

8、的检测均采用直接竞争ELISA法。酶联免疫检测病毒抗体的方法类型抗原抗体酶标抗体(PRV)疫苗直接竞争ELISA法加底物加底物加底物阴性阳性孵育(1)显色孵育(2)实例5.猪繁殖与呼吸道综合症(蓝耳病，PRRS/US)的间接ELISA法在酶标板微孔条上预包被PRRS/US的抗原，阳性对照或样本中的抗体在第一次孵育时和包被抗原特异性结合；清洗微孔后加入酶标记的抗猪的二抗，第二次孵育时酶标二抗和抗原抗体复合物结合。再次清洗微孔后加入底物TMB显色，样本吸光值与抗体浓度正相