酸奶微生物检验

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1、《酸奶卫生标准》编号：GB19302—2010一、准备内容：1、无菌器材准备表：仪器名称数量平板培养皿121ml移液管510ml移液管1玻璃棒1试管25烧杯3锥形瓶32、培养基、试剂准备表：名称体积（ml）BPW225LST100BGLB100氯化钠肉汤225B-P琼脂平板50平板计数琼脂培养基150生理盐水225、100备注：无菌生理盐水氯化钠2.5g蒸馏水300ml平板计数琼脂有现成的培养基，直接称取即可，配制120ml月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤胰蛋白胨或胰酪胨2.0g氯化钠0.5g乳糖0.5g磷酸氢二钾（K2HPO4）0.275g磷酸二氢钾（KH2PO4）0.275g月桂基硫

2、酸钠0.01g蒸馏水100mL将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，煮沸溶解，调节pH，高压灭菌121℃，15min。煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤蛋白胨1g乳糖1.0g牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液20mL0.1%煌绿水溶液1.33mL蒸馏水80mLpH7.2±0.1A.2.2制法将蛋白胨、乳糖溶于约50mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液20mL（将2.0g脱水牛胆粉溶于20mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液1.33mL，用蒸馏水补足到100mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。12

3、1℃高压灭菌15min。7.5%氯化钠肉汤蛋白胨2.25g牛肉膏1.125g氯化钠16.875g蒸馏水225mLpH7.4将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。Baird－Parker琼脂平板胰蛋白胨0.5g牛肉膏0.25g酵母膏0.05g丙酮酸钠0.5g甘氨酸0.6g氯化锂（LiCl·6H2O）0.25g琼脂1.0g蒸馏水47.5mLpH7.0±0.2增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。A.4.3制法将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。121℃高压灭菌15min。临用时加热

4、溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。一、指标表3微生物限量项目采样方案a及限量（若非制定，均以CFU/g或CFU/ml表示）检测方法ncmM菌落总数5210000100000GB4789.2大肠菌群5210100GB4789.3MPN计数法沙门氏菌500/25g(ml)-GB4789.4金黄色葡萄球菌5110100GB4789.10定性检验霉菌≤90GB4789.15A：样品的分析及处理按GB4789.1和GB4789.18执行。B：不适用于以发酵稀奶油为原料的产品。表4乳酸菌数项

5、目限量[CFU/g(mL)]检验方法乳酸菌数a≥1×106GB4789.35a发酵后经热处理的产品对乳酸菌数不作要求。二、样品来源：三、时间安排表菌落总数大肠杆菌霉菌和酵母菌金黄色葡萄球菌沙门氏菌乳酸菌第1天无菌器材准备配置PCA无菌器材准备配置LST无菌器材准备配置孟加拉红无菌器材准备配置样液无菌器材准备BPW无菌器材配置MRS平板第2天配置样液制平板接种LST配置BGLB配置样品液制平板划线接种到Baird－Parker氏培养基和血平板配置样液制BS和XLD平板第3天培养（36℃）观察LST产气情况，有产气的接种BGLB培养(28℃)革兰氏染色镜检划线接种到BS和XLD平板第4天菌落计

6、数观察BGLB菌落计数观察XLD平板第5天报告查MPN表报告报告报告观察BS平板一、样品配置及器材准备无菌器材样品液培养皿试管移液管1ml*3/10ml*1;锥形瓶500ml*1/250ml*1;烧杯*1稀释度配置菌落总数9212325g(ml)样品+225ml7.5%的生理盐水大肠菌数—10123霉菌和酵母菌92123金黄色葡萄菌属沙门氏菌乳酸菌一、实验内容（1）菌落总数操作步骤1、样品的稀释1.1液体样品：称取25g样品置盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶，摇匀，制成1:10的样品匀液。1.3用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸

7、管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。1.4另取1mL无菌吸管，按上述操作程序，制备1:1000稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿20mL左右，并