SSR实验操作流程

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1、SSR实验操作流程比较功能基因组学实验室一、试剂配制0.2%亲水bindingsilence（现配现用）1500μL95%乙醇，7μL冰醋酸，再加入3μLbindingsilence，混匀后使用。注：硅烷可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。特别易燃，要远离热、火花和明火。其挥发的气雾对粘膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有刺激作用。戴合适的手套和安全眼镜、始终在化学通风橱里使用。0.5%疏水repelsilence（购买后可直接使用）TBE母液（5×TBE）TrisBase54g硼酸27.5gEDTA(0.5MpH8.0)20ml搅拌溶化，定容至1000ml，无需灭菌

2、，室温保存，母液的pH值应保持在8.3左右。注：如果用得比较多，可以配成10倍或者20倍的备用。Urea－TBE(一块胶板用量)：5×TBE12ml尿素27g加双蒸水溶解后定容至51ml，使用滤纸过滤。注：冬天配制时可以用微波炉加热使之迅速溶解，最好立即趁热过滤，使用时间不宜过长，尽量在3周内用完。尿素可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康，戴合适的手套和安全眼镜。40％丙稀酰胺丙稀酰胺380g甲叉双丙稀酰胺20g加热至37℃使之溶解，加水定容至1000ml，用滤纸过滤，棕色瓶避光保存于室温。注：丙烯酰胺（未聚合的）是一种强的神经毒素并可通过皮肤吸收（其效应是累加的

3、）。当称量粉末状丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺时，要佩戴合适的手套和防护面具，在通风橱内操作。人们多数认为多聚丙烯酰胺是无毒的，但亦应小心操作，因为可能含有少量未聚合的丙烯酰胺。10％APS（过硫酸铵）超纯过硫酸铵2g超纯水18ml溶解后，4℃保存，一个月之内用可以不放4℃保存。注：过硫酸铵对粘膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大的危害性。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱内操作，操作完后彻底洗手。TEMED（购买后可直接使用）电泳级的TEMED可购自Bio-Rad，Sigma或其他供应商。注：TEMED对粘膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大的危害性，

4、吸入和致命。长时间接触可引起严重的刺激或灼伤，操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱内操作，操作完成后彻底洗手。TEMED挥发的气体能传到相当远的火源并引起花光四闪。切勿靠近热、火花和明火。Loadingbuffer：去离子甲酰胺100ml0.5MEDTA(pH8.0)2ml二甲苯腈蓝cyanol0.05g溴酚蓝0.05g混匀后置于4℃保存。注：购买蒸馏的去离子化甲酰胺，分装成小份充氮贮存于-20℃，或购买去离子化试剂级的甲酰胺。许多批号的试剂级甲酰胺已足够的纯，无须进一步处理即可使用。但是，如果呈现黄色，则必须进行去离子化处理。处理方法见《分子克隆

5、实验指南》。甲酰胺是一种致畸剂，其挥发的气雾对粘膜、上呼吸道组织、眼睛和皮肤有刺激作用。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全眼镜。当用浓的甲酰胺工作时，要始终在化学通风橱内进行，工作液尽可能的遮盖。固定液：无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml。配制成终浓度为10％乙醇，0.5%冰醋酸的固定液。染色溶液(ACS试剂)：无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml，AgNO31g。配制成终浓度为10％乙醇，0.5%冰醋酸，0.2%AgNO3的染色液。注：染色液配置用双蒸水。AgNO3是一种很强的氧化剂，要谨慎操作。它可因吸入

6、、咽下或皮肤吸收而损害健康，避免接触皮肤、戴合适的手套和安全眼镜。与其他物质接触可引起爆炸。显影溶液：15gNaOH，0.5ml甲醛，水500ml。终浓度为3％NaOH，0.1%甲醛。注：显影液可以用自来水配置，每次用时重新加甲醛，甲醛有很大的毒性并挥发，也是一种致癌剂。很容易通过皮肤吸收，对粘膜和上呼吸道组织、眼镜和皮肤有刺激损伤作用。避免吸入其挥发的气雾。戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱内使用，远离热、火花和明火。二：实验步骤1、玻璃板清洗准备：1）用洗涤剂把玻璃反复擦洗干净，沥干备用。在疏水玻璃板上均匀涂上300-500μL的0.5%的疏水剂Bin

7、dingSilane。可放过夜。2）配制凝胶前，在亲水玻璃板上均匀涂上2％的亲水剂RepelSilane，保证玻璃板的每个地方都涂上亲水剂，晾干至少5min，可以用酒精轻轻擦拭以去掉多余的亲水剂。3）玻璃板彻底干燥后进行玻璃板组装。两块玻璃板两边边缘割伤配套的硬纸条，橡皮夹子夹住两边，在橡皮夹子里加上硬纸片可以保证玻璃板的水平，可以有效地防止条带跑歪。下边套上有旋钮的塑料套，旋紧旋钮，以防止底下漏胶在插入梳子的位置插入一个硬纸条以保证上方凝胶界面水平且整齐。4）将装好的玻璃板水平放置于桌面上，亲水玻璃板置于下面，而带电极的疏水玻璃板朝上，保证玻璃板的水平。以上是

8、进口一起的操作，国产六一