粗糙脉胞菌顺序四分子分析

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1、实验六粗糙脉胞菌顺序四分子分析实验目的1.了解粗糙脉胞菌的生活周期及特性；2.学习粗糙脉胞菌的培养方法和杂交技术；3.学习顺序四分子的遗传学分析方法，进行有关基因与着丝点距离的计算和作图。实验材料1．粗糙链孢霉野生型菌株，Lys+，分生孢子粉红色；2．粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，Lys-，分生孢子白色。实验原理本实验用赖氨酸缺陷型与野生型杂交，得到的子囊孢子分离为4个黑色的（+）和4个灰色的（-）。黑色孢子为野生型，赖氨酸缺陷型孢子成熟迟，在野生型孢子成熟变黑时，还未变黑，而呈浅灰色；根据黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列顺序，可知合子在减数分裂时，基因Lys和

2、着丝粒之间发生交换的情况，最终可有两大类型的子囊出现，即第一次分裂分离子囊和第二次分裂分离子囊。实验原理第一次分裂分离子囊第二次分裂分离子囊AAaa或aaAAAaAaaAaAAaaAaAAa实验原理第一次分裂分离形成的子囊为非交换型子囊；第二次分裂分离形成的子囊为交换型子囊；第二次分裂分离子囊的出现，是由于有关的基因和着丝粒之间发生了一次交换的结果。染色体上两个基因座之间的距离越远，则它们之间发生交换的频率越高。因此，第二次减数分裂分离的子囊越多，说明基因和着丝粒间的距离越远。实验原理第二次分裂分离子囊数1/2子囊总数100%着丝粒与基因间的重组率=MII

3、1/2MI+MII100%重组率=或：基因与着丝粒间距离（图距）：重组率去掉%即为图距，单位为厘摩（cM）。实验步骤1.菌种活化2.杂交接种3.培养4.压片观察实验步骤4.压片观察：将附有子囊果的滤纸条放入3%来苏尔溶液10min，杀死孢子，以防止污染实验室；取一载玻片，滴1~2滴3%来苏尔溶液，然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上；盖上另一载玻片，用手指压片，将子囊果压破；置显微镜下观察实验结果可观察到一个子囊果中散出30~40个子囊；观察子囊孢子的排列情况；实验结果观察一定数目的子囊果，记录每个杂交型完整子囊的类型，并计算出Lys基因与着丝粒间的距离。1

4、.填表2.列出计算公式及结果3.绘制显微镜下观察到的杂交子囊的图注意！！本次实验观察过的载玻片、用过的镊子等物品都需放入消毒液中浸泡10分钟后取出清洗，以防污染实验室！