真核生物基因组DNA的提取、电泳

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1、分子生物学实验1、欢迎大家参加分生实验的学习！2、分生实验的重要性；3、每组2人，做一份实验；4、守纪律，听老师安排，穿白衣；5、同学们在听课时要作好记录;6、上课时间、课间休息。考试形式实验成绩考核占总成绩40%，满分为40分。缺实验课成绩者，本课程不予通过。随堂考试（10分）(主要考察理论课与实验课结合内容)闭卷考试（15分)(实验方法及原理、实验结果及注意事项、仪器设备操作及注意事项和对失败结果的原因的分析)实验设计（15分）(实验名称、实验目的、方法和步骤预期实验结果、关键问题讨论及参考文献)实验课安排实验一基因组DNA的提取实验二PCR及琼脂糖凝胶电泳检测实验三PCR产物的限制性酶

2、切片段分析实验四总RNA的提取及逆转录实验五PCR产物的TA连接实验六转化实验七质粒的提取、酶切鉴定实验八讨论及实验课考试实验课安排1.提取基因组DNA重组质粒6.连接产物转化无质粒的E.Coli死亡有质粒的E.Coli存活2.PCR获取目的基因7.重组质粒提取及酶切鉴定质粒5.TA连接4.RNA提取与逆转录T载体平板筛选一、加样器的使用及注意事项1、用途2、使用2.1根据取样量，选择合适的加样器。5ul、50ul、500ul，应选择哪个加样器?顶部标有加样器的最大量程，分别为：20ul:0.5~20l100/200ul:20~100/200l1000ul:200ul~1000l实验仪

3、器的使用及注意事项练习：加样器读数为100，实际体积各为多少?2.2如何调节？(1)首先观察目前读数,假设为050:1000l:500l100l:50l20l：5l(2)顺时针调节---读数变小逆时针调节---读数变大(3)注意：调节前加样器读数正处于最大量程或最小量程时，如果向错误方向调节，马上会超出量程，将会损害加样器的精度。2.3加样器使用步骤(示教及学生练习)：6）(吸头内有液体时，不能将加样器倒置或平放，以防液体倒流损坏加样器！)贴容器内壁，将液体匀速打出，加样器推到第二挡。观察吸头内液体是否完全打出并立即弃于废物盒内.5）抬起加样器,估计体积是否正确,将外壁液体用容器

4、口引流回去4）缓慢松开拇指,吸取液体。松开过快，液体上冲会腐蚀加样器;完全放开拇指后，停留约半秒钟,急于离开液面，容易吸入空气。3）将吸头插入液面下适当深度，过深可能会腐蚀加样器,过浅可能会吸入空气。2）吸取液体前，先打到第一挡。1）选择加样器,观察读数,调节读数，吸头的安装要紧密。不要用手直接拿吸头，安上吸头后一定要再固定一下1、打开电源2、离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。二、离心机的使用注意事项1代表转速盘上方的数据，2代表下方的数据。3、样品配平,对称放入离心机(管的连接处朝外).4、设定离心时间(如设定2分钟，可定时多点时间，再用手表记时)。5、统一离心，逐渐升到

5、要求转速。实验一、真核生物基因组DNA的提取和电泳一、实验背景高等生物的基因组相当宠大。真核细胞基因组约含１万个结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对真核细胞基因组的结构，组成，以及表达调控的研究是至关重要的研究的起点就是要获得纯度高－不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染；得率好－以便有足够量用于分析；基因组相对完整－不断裂的基因组以便用于以后PCR分析，RFLP分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。掌握小鼠肝脏组织模板DNA的提取技术。学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和技术。第一部分：肝组织制

6、备、蛋白酶k消化第二部分:酚氯仿抽提、乙醇沉淀第三部分：DNA琼脂糖凝胶电泳三、实验材料小鼠肝脏组织四、主要试剂（稍后讲解）二、实验目的五、实验步骤（马上讲解）1.取新鲜小鼠肝组织（约300-500mg），小米粒大小，组织块不宜过大,放在毛玻璃片上立即研磨,研磨要彻底。2.将研磨后的肝组织转移至加有460lNE溶液的EP管中，混匀。实验第一部分小鼠肝组织的制备、蛋白酶K消化注意事项组织磨得越细越好。细胞中含有大量的DNA酶，因此，第一步的操作（EDTA：抑制酶活性）应迅速，以免细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。注意事项：离心时离心机内样品平衡后对称放置加样器加样准确。加样器使用提示：

7、（1）吸头的安装要紧密。（2）打到第一挡，将吸头插入液面下适当深度（3）缓慢松开拇指，吸取液体。拇指完全放开后，吸头在液面下停留一下（约半秒钟）（4）将外壁液体用容器口引流回容器。吸头内的体积应大致正确。（5）贴目的容器内壁，将液体匀速打到目的容器内，加样器推到第二挡。观察吸头内液体是否完全打出。1000r/m,离心5min(统一离心)，将上层细胞悬液转移至另一EP管中，用NE溶液补足至500l，弃掉下层