病毒的分类及微生物检验

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1、病毒的分类一、分类原则核酸的性质与结构病毒大小与形态衣壳对称性和壳粒数目有无包膜对理化因素的敏感性抗原性生物学特性（繁殖方式、宿主范围、传播途径和致病性）二、病毒分类系统和命名（一）病毒分类一般系统病毒分类系统将病毒分类为科(families)、属(genera)、种(species)等三级，或科、亚科、属、种等四级。根据病毒体的形态、基因结构和复制模式等特征将病毒分为科和亚科；在科或亚科中又根据理化特性和血清学特性等分病毒属，属名后缀为—virus，属下分为不同的病毒种。分类可将病毒分为科、亚科和属常用核酸类型分类1DNAvir

2、us(DNA病毒中有9科)2RNAvirus(ssRNA－7科.ssRNA＋7科.dsRNA2科)3反转录病毒(DNA和RNA反转录病毒中有2科)依传播方式和感染部位分类1虫媒病毒2肠道病毒3呼吸道病毒4肝炎病毒5性传播病毒（二）非寻常病毒的分类1卫星病毒（satellites）2类病毒（viroids）3朊粒（prion）第三节病毒学诊断自身免疫病和肿瘤密切相关。病毒性疾病在人类疾病中占有十分重要的地位。由于病毒感染的防治原则不同于细菌等其他微生物，尽早判定病人感染或某传染病的流行是由病毒所致，是医生和微生物学实验室的责任和任

3、务。病毒的分离与鉴定当然是病毒病原学诊断的金标准，但因病毒是严格细胞内寄生，病毒分离必须有活的细胞支持，故病毒的分离鉴定较困难。一、标本的采集、运送和处理1.应在感染早期（发病1～2天内）采集。2.必须无菌操作，对用于病毒分离培养的污染标本用高浓度抗生素处理过夜，必要时需加抗真菌药物等3.及时送检，送检的组织等可放入含有抗生素的50%甘油缓冲盐水或二甲基亚砜中低温冷藏。4.血清学检查的标本，尤其检测抗病原体的IgG型抗体，应分别在发病初期和恢复期采集双份血清，只有当恢复期血清抗体效价比初期升高4倍或以上，才具有确诊意义。分离培养

4、鉴定(污染标本用抗生素处理过夜)快速诊断鸡胚红细胞凝集试验红细胞凝集抑制试验细胞培养CPE电镜检测中和试验TCID50pfu测定MOI测定动物接种观察发病情况中和试验免疫学检测ID50测定LD50测定形态学电镜观察病毒颗粒（大小、形态）光学显微镜观察包涵体抗原检测ELISAIFRIAWB核酸检测核酸电泳核酸杂交PCR基因芯片基因测序抗体检测ELISARIAIFWB病毒成分检测标本采集二、病毒的分离与鉴定以下情况需考虑进行病毒分离与鉴定：1.病程长且诊断困难的病人。2.怀疑为新现病毒（emergentvirus）感染或已被消灭的病

5、毒性疾病怀疑“死灰复燃”。3.为鉴别临床上具有相同症状的疾病。4.监测所用减毒活疫苗。5.用于病毒生物学性状的研究或流行病学调查等。（一）病毒的分离培养1．细胞培养：原代培养细胞、二倍体细胞株、传代细胞系或株标本接种后溶细胞型感染病毒可致细胞出现细胞病毒效应（CPE），稳定感染病毒细胞并不出现明显病变，但被感染的细胞膜表面会表达病毒蛋白等标志物，如血凝素、神经氨酸酶、病毒特异性抗原等。2．鸡胚培养和动物接种：流感病毒的分离培养虽可用犬肾传代细胞（MDCK）,但鸡胚接种仍是最常用的敏感而特异的方法。动物接种是最原始的分离病

6、毒的方法，但目前少用。（二）病毒的鉴定1．病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标（1）细胞病变（cytopathiceffect,CPE）大多数病毒属溶细胞型感染，在敏感细胞内增殖会出现CPE。CPE表现为细胞内颗粒增多、圆缩、聚集、融合，有的可形成包涵体，出现细胞溶解、脱落、死亡等。不同病毒的CPE特征不同。因此，观察病毒所致CPE的特点，根据细胞类型，细胞病变种类可对标本中感染的病毒进行判定。脊髓灰质炎病毒感染所致CPEa.未感染的vero细胞（一种非洲绿猴肾细胞系）b.脊髓灰质炎病毒感染的vero细胞（显示细胞圆缩、分散、坏死、脱

7、落）。（2）红细胞吸附（hemadsorption）包膜上带有血凝素的病毒感染敏感细胞后，血凝素会出现于细胞膜表面，使感染细胞能与加入的红细胞结合出现红细胞吸附现象，这是检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标。（3）中和试验（neutralizationtest,NT）用抗某病毒血清先与待测病毒悬液混合，经作用一定时间后接种敏感细胞，培养后观察CPE或红细胞吸附现是否消失，即特异性抗体是否能中和相应病毒的感染。如用不同浓度的抗血清进行中和试验，还可根据抗体的效价对待测病毒液进行半定量检测。（1）空斑形成试验（plaqueformatio

8、n）（2）50%组织细胞感染量（3）感染复数（Multiplicityofinfection,MOI）2．病毒感染性测定及病毒数量测定三、病毒感染的快速诊断病毒的分离与鉴定是病毒诊断的金标准，但临床实验室应用困难，而且费时，对临床病毒感染症的诊治帮