疫细胞的分离及检测技术

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1、第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术第一节           免疫细胞的分离一、       外周血单个核细胞分离二、       淋巴细胞的分离三、T细胞和B细胞的分离四、T细胞亚群的分离第二节淋巴细胞标志及亚群分类一、 Ｔ细胞表面标志及亚群二、B细胞表面标志三、NK细胞表面标志第三节其他的免疫细胞第四节免疫细胞表面标志的检测及应用一、  免疫细胞表面标志的检测方法二、 淋巴细胞表面标志检测的临床意义思考题小结第一节免疫细胞的分离外周血单个核细胞分离淋巴细胞的分离T细胞和B细胞的分离T细胞亚群的分离一、外周血单

2、个核细胞分离外周血单个核细胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。细胞分离基本原理不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.093粒细胞密度为1.092单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.075-1.090不同细胞密度不同用1.077±0.001的分层液可将细胞分离密度梯度离心(Ficoll)离

3、心二、淋巴细胞分离贴壁粘附法吸附柱过滤法磁铁吸引法Percoll分离液法（连续密度梯度离心）（去单核细胞）E花环沉降法尼龙毛柱分离法三、T细胞和B细胞的分离四、T细胞亚群的分离亲和板结合分离法磁性微球分离法荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法磁珠大小可以选择大小免疫磁珠分离细胞的特点比较比较项目大磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要

4、求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强的磁场来分离细胞。收率得率高。得率不高。纯度纯度低。纯度高。分离时间分离速度快。分离速度慢。分离成本成本低。需要很强的磁场来分离细胞，需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行。免疫磁珠法细胞分选过程免疫磁珠细胞分选装置全自动细胞分选系统流式细胞分析仪第二节淋巴细胞标志及亚群分类常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（Clusterofdifferentiation，CD）。细胞表面分化抗原（CD抗原）适用于T、B细胞的分离已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离（阴

5、性分选）一、T细胞表面标志及其亚群CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞（helpTcell,Th）CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞（cytotoxicTcell,TcorCTL）CD4+CD25+调节性T细胞（regulatoryTcell,TrorTreg）二、B细胞表面标志SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，部分CD分子是B细胞的重要表面标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为C

6、D19阳性，B2细胞为通常所指的B细胞。三、NK细胞表面标志人类NK细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。T细胞及NK细胞第三节其他的免疫细胞抗原提呈类细胞表面标志第四节免疫细胞表面标志的检测及应用免疫细胞表面标志的检测方法淋巴细胞表面标志检测的临床意义一、免疫细胞表面标志的检测抗体致敏细胞花环法免疫细胞化学法免疫荧光法流式细胞分析法二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要指标。对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助于免疫

7、缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应的监测。临床常见疾病中的T淋巴细胞的变化思考题1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离纯化？2.淋巴细胞有哪几类细胞？能用形态学的方法加以区别吗？3.将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？5.T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么？6.什么是细胞表面标志？其作用是什么？7.细胞表面标志的检测方法有哪些？8.利用细胞表面标志（CD抗原）分离细胞的方法有哪几种？9.T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞的主要生物标志是什么？10.淋巴细胞表面标

8、志检测的临床意义是什么？小结淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的表面标志是CD抗原。进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一。但目前看来，还很少有只通过