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《北工大微生物学第2章》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第二章微生物的纯培养和显微技术培养物:在人为规定条件下培养,繁殖得到的微生物群体.纯培养物-----而具有一种微生物的培养物.显微技术-----显微标本的制作,观察,测定,分析及记录等.自然环境如土壤和水中，通常栖息着的是许多不同微生物混杂在一起的群体。哪怕是一粒砂或尘土，也常含有多种细菌及其它微生物。第一节微生物的分离和纯培养一.无菌技术培养物的纯洁污染自身/环境1.微生物培养常用的器具及其灭菌试管玻璃烧瓶培养皿培养基第一节微生物的分离和纯培养2.接种操作二、用固体培养基获得纯培养微生物在自然界
2、中不仅分布很广，而且都是混杂地生活在一起。要想研究或利用某一微生物，必须把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含一种微生物的培养。微生物学中将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。纯培养的分离，是研究和利用微生物的第一步，是微生物工作中最重要的环节之一。最常用的方法有涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法、稀释摇管法等分离法等。二、用固体培养基获得纯培养涂布平板法----将已经熔化的培养基倒入无菌培养皿,制成无菌平板,冷却凝固后,将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面,再
3、用无菌涂布棒将菌液均匀的分散至整个平板表面,经培养后挑取单个菌落.涂布平板法:平板涂布分离法（SpreadPlate）简单易行，但易造成机械损伤Liquidspecimenisspreadonthesurfaceofsolidagarwithasterilebentglassrod.纯培养的分离方法稀释倒平板法稀释倒平板法这是最常用的纯种分离法，先将待分离的材料作一系列的稀释(如1：10、1：100、1：1000、1：10，000……)，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至45℃的琼脂培养基
4、相混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，平皿上就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。稀释倒平板法分离微生物平板划线法将已熔化的培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，用接种环沾取少许待分离的材料，在培养基表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物将随着划线次数的增加而分散，经保温培养形成菌落。划线开始的部分细菌分散度小，形成的菌落往往连在一起。由于连续划线，微
5、生物逐渐减少，划到最后，常可形成单个孤立的菌落。这种单个菌落可能由一个细胞繁殖而来，故可获得纯培养。用其他工具如弯形玻璃代替接种环，在培养基表面涂布，亦可得到同样结果。此法较为简便。平板划线法分离微生物平板划线分离法（StreakPlate）特点：快速、方便。分区划线（适用于浓度较大的样品）连续划线（适用于浓度较小的样品）Aninoculatingloopisusedtothinoutorganismsonthesurfaceoftheagar.稀释摇管法先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热,使琼
6、脂熔化后冷却并保持在500C左右,将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释,试管迅速摇动均匀,冷凝后,在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡混合物,将培养基和空气隔开.培养后,菌落形成在琼脂柱的中间.进行单菌落的挑取和移植,需要先用一灭菌针将液体石蜡-固体石蜡盖取出,再用一只毛吸管插入琼脂和管壁之间,吹入无菌无氧气体,将琼脂柱吸出,置放在培养皿中,用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植.微生物纯培养分离方法的比较涂布平板法:简单易行，但易造成机械损伤稀释平板法既可定性，又可定量，用途广泛平板
7、划线法方法简便，多用于分离细菌稀释摇管法局限于高度专业化的科学研究Viablecellcount1.dilutesample1ml9ml101001000104105106107cellno/ml2.plateout0.1mlInoculatinganagarplatetoobtainsinglecoloniesMixedculturePurecultureMixedcultureOralswabSwabfromsoleofshoeEachcolonywasexaminedmicroscopica
8、lly三、用液体培养基获得纯培养个体大的细菌原生动物藻类稀释法----接种物在液体培养基中进行顺序稀释,以得到高度稀释效果,使一只试管中分配不到一个微生物.如果经稀释后的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物.如果经稀释后的试管中有微生物生长的比例提高了,得到的纯培养物的概率就会下降.液体稀释法四.单细胞挑取法分离这种方法是从待分离的材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养。具体方法是将显微镜挑取器装置在显微镜上，把一滴菌悬液置于载玻片上，用
