生物制药工艺学第13章生化药物制造工艺蛋白多肽药物

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1、多肽蛋白类药物脑垂体所分泌的各种多肽激素下丘脑所形成的激素释放因子和激素释放抑制因子脑啡肽、阿片样肽及胃肠激素脑-肠肽及多肽类细胞生长调节因子多肽类药物1950s1960s1970s1990s多肽类药物分类：多肽激素垂体多肽激素促皮质素（ACTH）、促黑激素（MSH）、脂肪水解激素（LPH）催产素（OT），加压素（AVP）等下丘脑激素促甲状腺激素释放激素（TRH）、生长素抑制激素（GRIF）、促性腺激素释放激素（LHRH）甲状腺激素甲状旁腺激素（PTH）、降钙素（CT）胰岛激素胰高血糖素胰解痉多肽胃肠道激素胃泌素、胆囊收缩素－促胰酶素（CCK-PZ）、肠泌素、肠血管活性肽（VIP）、抑胃素（G

2、IP）、缓激肽、P物质胸腺激素胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子多肽类细胞生长调节因子表皮生长因子（EGF），转移因子（TF），心钠素（ANP）等。含有多肽成分的其它生化药物骨宁、眼生素、血活素、氨肽素、妇血宁、脑氨肽、蜂毒、蛇毒、胚胎素、助应素、神经营养素、胎盘提取物、花粉提取物、脾水解物、肝水解物、心脏激素等。多肽类药物分类：蛋白质激素垂体蛋白质激素生长素（GH），催乳激素（PRL），促甲状腺素（TSH），促黄体生成激素（LH），促卵泡激素（FSH）。促性腺激素人绒毛膜促性腺激素（HCG），绝经尿促性腺激素（HMG），血清性促性腺激素（SGH）。胰岛素及其他蛋白质激素胰岛素，胰抗脂肝素，松弛素，

3、尿抑胃素。血浆蛋白质白蛋白，纤维蛋白溶酶原，血浆纤维结合蛋白（FN）,免疫丙种球蛋白，抗淋巴细胞免疫球蛋白，Veil’s病免疫球蛋白，抗－D免疫球蛋白，抗－HBs免疫球蛋白，抗血友病球蛋白，纤维蛋白原，抗凝血酶Ⅲ，凝血因子Ⅷ，凝血因子Ⅸ。蛋白质类药物分类蛋白质类细胞生长调节因子干扰素α、β、γ（IFN）,白细胞介素1～7（IL），神经生长因子（NGF），肝细胞生长因子（HGF），血小板衍生的生长因子（PDGF），肿瘤坏死因子(TNF)，集落刺激因子(CSF)，组织纤溶酶原激活因子(tPA)，促红细胞生成素(EPO)，骨发生蛋白（BMP）。粘蛋白胃膜素、硫酸糖肽、内在因子等。胶原蛋白明胶、阿胶等

4、碱性蛋白质硫酸鱼精蛋白蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂凝集素PHA、ConA蛋白质类药物分类多肽化学合成概述合成原理：是一个重复添加AA的过程，一般自C端向N端合成。合成方法：（1）液相合成（2）固相合成（1963年R.B.Merrifield创立，并因此获1984年获诺贝尔化学奖）1953年Du.Vigneaud等合成催产素（oxytocin,OXT，9AA单链肽）1963年合成促肾上腺皮质激素（ACTH，39AA单链肽）1965年中国科学家合成了胰岛素（Insulin，51AA双链肽）多肽合成的主要步骤氨基的保护和羧基的活化羧基的保护和氨基的活化接肽和去保护基氨基保护基苄氧羰基——强酸脱除叔丁氧

5、羰基（BOC）——三氟乙酸（TFA）脱除9-芴甲氧羰基（Fmoc）——碱脱除多肽的固相合成(Fmoc保护法)（1978年改进的方法，避免了强酸处理）原料选择上清破碎提取沉淀变性复性蛋白质纯化蛋白质药物－SeparationandPurification纯度活性鉴定合格不合格精品发酵生物组织Protein--Separation原则：富含所需蛋白质多肽成分的，易于获得、易于提取、无害（原核、真核发酵；生物组织）注意事项：种属、发育生长阶段、原料的环境、解剖部位、生物状态溶解性稳定性合适的溶剂原料选择提取Protein--Purification纯化根据目的蛋白与杂质之间的差异进行纯化。1.根据蛋

6、白质的pI的不同进行纯化，其方法有：1）pI沉淀法2）pI沉淀法与盐析法相结合3）等电聚焦法2.蛋白质分子形状和大小的不同进行纯化，其方法有1）凝胶过滤2）超滤法3）离心法4）透析法3.蛋白质的溶解度不同进行纯化，其方法有：a)盐溶与盐析法b）结晶法c）有机溶剂沉淀法4.蛋白质电离性质不同进行分离：离子交换法5.蛋白质功能专一性不同进行纯化：亲和层析法、假亲和层析法6.蛋白质在溶剂系统中分配不同进行纯化：萃取法7.蛋白质的选择性吸附的性质进行纯化：吸附法8.蛋白质的其他特殊性质进行纯化分离纯化方法的选择1.分离纯化的早期使用方法的选择特点：提取液中的物质十分复杂，目的蛋白浓度较稀。方法选择原则

7、：低分辨能力到高分辨能力，而且负荷量较大为合适。2.各种分离纯化方法的使用程序原则：相同性质的纯化方法一般不重复使用。纯化方法顺序先后的安排上要考虑到有利于减少工序，提高效率。3.分离纯化后期的保护性措施4．对每一步骤方法的优势进行综合评价每一个分离纯化步骤方法的好坏，除了从分辨本领和重现性二方面考虑外，还注意方法本身的回收率的高低。纯化方法选择指南猪胰岛素牛胰岛素赖脯人胰岛素（礼来公司、速效In