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《中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增,克隆及分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、9期宋慧群等：中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析5中国弓形虫虫株529bp重复序列的PCR扩增、克隆及分析宋慧群1，张德林2，廖申权1，翁亚彪1，林瑞庆1，朱兴全1（1华南农业大学兽医学院，广州510642；2中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州730046）摘要：【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529bp重复序列的变异进行研究
2、，从而为进一步的分子诊断和分子遗传学研究以及弓形虫病的防制奠定基础。【方法】抽提基因组DNA后，用PCR方法对10个虫株的529bp重复序列进行扩增；扩增产物经纯化后克隆于pGEM-TEasy质粒载体，再经菌落PCR及酶切鉴定阳性克隆，然后对阳性克隆进行测序及序列分析。【结果】10个弓形虫虫株的529bp重复序列都不完全相同，它们之间的核苷酸序列变异范围为0.8%～2.9%。变异主要位于第32～55位碱基之间,这些碱基变异与虫株的宿主来源、地域来源及毒力之间没有相关性。【结论】529bp重复序列可
3、作为遗传标记，用于弓形虫与其它寄生虫的种间鉴定，但不适合用于研究弓形虫的种内遗传变异。关键词：弓形虫；PCR；529bp重复序列；序列分析；遗传变异Amplification,CloningandSequenceAnalysisofaRepetitive529bpDNAFragmentfromToxoplasmagondiiStrainsfromChinaSONGHui-qun1,ZHANGDe-lin2,LIAOShen-quan1,WENGYa-biao1,LINRui-qing1,ZHUXi
4、ng-quan1(1CollegeofVeterinaryMedicine,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642；2LanzhouVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Lanzhou730046)Abstract:【Objective】Theobjectiveofthepresentstudywastoexaminesequencevariatio
5、nintherepetitive529bpDNAfragmentamong9T.gondiistrainsfromdifferenthostsandgeographicallocationsinChina,andtocomparethesequenceswiththatoftheRHreferencestrain.【Method】The529bpfragmentwasamplifiedbyPCRfromgenomicDNAofthe10T.gondiistrains,andtheamplicons
6、werepurified,clonedintopGEM-TEasyvectorandtherecombinantplasmidswereidentifiedbycolonyPCRanddigestionwithendonucleaseEcoRI,andthensequenced.【Result】Sequencevariationintherepetitive529bpDNAfragmentrangedbetween0.8%-2.9%amongthe10T.gondiistrains,withseq
7、uencepositionsof32～55nucleotidesbeingthemostvariableregion.Butthesequencevariationwasnotrelatedtovirulence.【Conclusion】ThefindingsofthepresentstudyshowedthattheintraspecificvariationintherepetitiveDNAfragmentwaslowandthisrepetitiveDNAfragmentprovidesa
8、nidealgeneticmarkerforthedifferentiationofT.gondiifromotherparasites,butitisnotsuitableforthestudiesofgeneticvariabilitywithinT.gondiioritsvirulence.Keywords:Toxoplasmagondii;PCR;Repetitive529bpfragment;Sequenceanalyses;Geneticvariation9期宋慧群等：
