中药制剂分析_第七章-生物样品的成分分析医学

《中药制剂分析_第七章-生物样品的成分分析医学》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第七章生物样品的成分分析第一节生物样品的制备第二节生物样品的成分分析第三节应用举例第一节生物样品的制备一、常用生物样品二、样品预处理一、常用生物样品（一）血样血样包括血浆、血清和全血，其中常用的是血浆。血浆是全血加肝素、草酸盐、枸橼酸等抗凝剂经离心后分取的上层清液，其量约为全血的一半。血清则是由血液中纤维蛋白元等影响下引起血块凝结而析出，离心后取上层清液而得。一般认为，药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度是与药物在作用点的浓度紧密相关的，即血浆中药物浓度可以反映药物在体内(靶器官)的状况。目前采用血药浓度的测定方法，大都测定原型药物总量，

2、主要用于药动学、生物利用度、药物浓度监测等研究。（二）尿液尿液主要用于药物代谢等研究。体内药物清除主要是通过尿液，以原型或代谢物及缀合物形式排出。尿液药物浓度较高，收集量可以很大，但尿液浓度变化较大，尿中药物浓度改变不直接反映血药浓度，尿液与血液中药物浓度的相关性不理想。此外尿液的采集具有在短时间内不可能多次取样，排尿时间较难掌握以及不易采集完全等缺点。一、常用生物样品（三）唾液唾液可用作药物浓度监测及药代动力学研究。唾液中药物浓度通常与血浆浓度相关，因此将唾液作为样本，就成为简便的、无损害的并能反映血药浓度的方法。唾液的采集不受地点、时间的

3、限制，容易获得，且许多用于血浆测定的方法稍加改进即可用于唾液的药物浓度测定。唾液药物浓度一般比血浆药物浓度低，但两者存在着恒定的比例关系，通过测定唾液药物浓度可推断血浆中药物浓度。与血浆药物浓度相比，唾液中药物浓度变化较大。此外，取各种脏器组织制成组织匀浆，在研究药物的体内分布、积蓄或代谢过程中常常使用。生物样品中往往存在很多酶，使样品处在变化之中，所以取样后最好立即分析，并应采取一切措施，如调pH值、加有机溶剂等，将待测成分转移到稳定状态。对血浆、血清样品，应尽快从全血中离心分离出来，一般最迟不超过24小时，分离后冰冻保存。尿液应在取样后立

4、即测定，若收集24小时或更长时间，不能立即测定时，应置4℃冰箱保存；若在室温保存，应在采样后立即加入防腐剂；若需放置较长时间则需冷冻贮存。二、样品预处理样品预处理是生物样品成分分析中极为重要、困难和繁杂的一部分。因为，药物在体内可以多种形式存在，如游离型和蛋白结合型，代谢物和缀合物等，需分别测定；待测物浓度很低，生物样品组成复杂，有众多内源性成分和各种潜在干扰物存在；待测成分类型众多，性质各异，很难制定固定的样品处理程序和方式。因此，样品预处理必须综合考虑成分类型、理化性质、存在形式、浓度范围、测定目的、选取的生物样本类型及测定方法等多种因素

5、，采取相应的分离步骤和净化技术。二、样品预处理（一）预处理方法选择依据1.待测成分理化性质样品的分离制备与分析方法均依赖于待测成分及其代谢物的理化性质，如成分的酸碱性、极性、挥发性、光谱特征、功能团性质、化学稳定性、蛋白结合程度等。2.待测成分浓度范围生物样品中待测成分浓度相差悬殊，对待测成分浓度高的样品，预处理要求可稍低；浓度越小则样品净化富集的要求越高。3.测定目的测定目的不同，对样品要求也不同。如需测定代谢物，则要求代谢物从缀合物中释放出来，并在不同pH值介质中分离，以获得酸性、中性或碱性代谢物。4.生物样品类型不同的生物样品处理方法不

6、同。例如，血浆、血清及组织匀浆等样品含有大量蛋白质，常需去除蛋白质后提取；而唾液有大量粘液蛋白，需离心沉淀除去；尿中药物大多呈缀合状态，常需采用酸或酶使缀合物水解。5.测定方法样品制备和需要净化的程度与所用测定方法是否专属，是否具分离能力等有关。例如，不具有高的分辨率的光谱分析法与兼有分离作用的色谱法相比，前者对样品分离纯化的要求就要比后者高。又如在各种免疫测定中通常不必考虑成分的分离，只需采取简单的浓集，这是因为免疫测定法具有很高的特异性。二、样品预处理（二）提取1.除去蛋白质(1)有机溶剂沉淀法：采用有机溶剂如乙腈、甲醇、乙醇、丙酮等沉淀

7、蛋白质。沉淀蛋白的效力由强至弱依次为乙腈、丙酮、乙醇和甲醇。其中用乙腈除去蛋白质，产生的沉淀容易分离，应用比较广泛。当用1～3体积的有机溶剂时，可使90％以上的蛋白质沉淀。(2)盐析法：加中性盐如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等，利用盐析作用使蛋白质沉淀。(3)酸性试剂沉淀法：常用的酸性沉淀剂有三氯醋酸、高氯酸、苦味酸等，其中10％三氯醋酸是最常用的蛋白沉淀剂。但三氯醋酸试剂中常含有杂质，致使一些方法的空白值偏高，其次是除去蛋白质后如采用乙醚为提取溶剂，三氯醋酸会溶入乙醚中干扰测定。(4)酶消化法：在温和的理化条件下，水解生物蛋白，将与蛋白结合的成分

8、释放，对蛋白结合率强的成分可显著改善回收率，避免成分在强酸下水解和较高温度时降解。采用HPLC检测时，无需再进行过多的净化操作。常用的蛋白水解酶有枯草杆菌蛋白酶、胰