《酶活力及酶》PPT课件

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1、第三节酶活力及酶动力学一、酶活力1、酶活力的测定酶活力的表示方法:酶活力：是指酶催化某以化学反应的能力，可用在一定条件下酶催化某一化学反应的反应速度来表示，即单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示，一般用单位时间内产物生成量来表示。V=[S]/t和V=[P]/tU（酶活力）单位：表示酶量的多少，酶活力单位与所采用的测定方法，反应条件等因素有关。国际酶学会提出使用统一的国际单位IU，即最适条件下25℃，每分钟催化1微摩尔底物所需要的酶量。2、酶的比活力比活力=活力单位系数/每毫克酶蛋白是表示酶纯度的一个指标。

2、3、酶转换系数表示酶的催化中心，每个活性中心或酶分子底物转换底物的分子数。4、酶活力的测定：比色法：产物与试剂生成有色物质，根据颜色深浅来计算。分光光度法：底物和产物光吸收性质不同，可根据吸收光谱的变化来计算。滴定法：产物之一是酸或碱可以使用此法。量气法。同位素测定法。酶联法：S+ESE1D+E2DE2FD：不能检测或不容易检测F：容易检测旋光法量热法层析计算题1、有1克淀粉酶制剂，用水溶解成1000毫升，从中取出1毫升测定淀粉酶活力，测得每5分钟分解0.25克淀粉。计算每克酶制剂所含的淀粉酶活力单位。（淀粉

3、酶活力单位的定义是：最适条件下每小时分解1克淀粉的酶量称为1个活力单位。）解：1、由题可知，1/1000克的淀粉酶能在5分钟内分解0.25克淀粉，1小时内1/1000克的淀粉酶能分解的淀粉为：0.25×（60/5）=3克；2、由淀粉酶活力单位定义（每小时分解1克淀粉的酶量称为1个活力单位），可知1/1000克的淀粉酶的活力单位为：3；3、所以，1克的淀粉酶制剂的活力单位为3×1000=3000。2、用AgNO3对在10毫升含有1.0毫克/毫升蛋白质的纯酶溶液进行全抑制，需用0.342微摩尔AgNO3，求该酶的最

4、低分子量。答：1、已知酶溶液的浓度是1.0毫克/毫升，体积是10毫升，因此该酶溶液中所含的酶蛋白质量应为：1.0毫克/毫升×10毫升=10毫克；2、而所用的抑制剂AgNO3的物质的量为0.342微摩尔，因为是求酶的最低分子量，则可假设酶只含一个活性中心，抑制剂与酶的作用关系是等分子数进行，则该酶溶液中所含酶的物质的量即为：0.342微摩尔。3、因此该酶的最低分子量为：10毫克/0.342微摩尔=2.92×104。2、影响酶作用的因素1)、酶浓度对酶反应速度的影响在有足够底物和其他条件不变的情况下，反应速度与酶浓

5、度成正比。当[S]>>[E]时，V=K3×[E]2)、底物3)、温度对酶反应速度的影响一方面是温度升高,酶促反应速度加快。另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。因此大多数酶都有一个最适温度。在最适温度条件下,反应速度最大。最适温度不是一个固定的常数，它随底物的种类、浓度,溶液的离子强度,pH,反应时间等的影响。例:反应时间短，最适温度高。反应时间长，最适温度低。4)、pH对酶反应速度的影响酶反应的最适pH（optimumpH）酶的最适pH也不是一个固定的常数，它受到底物的种类

6、、浓度;缓冲液的种类、浓度;酶的纯度;反应的温度、时间等的影响。例:碱性磷酸酶催化磷酸苯酯水解时[s]为2.5x10-5M，最适pH为8.3[s]为2.5x10-2M，最适pH为10.0pH影响反应速度的原因(1)pH影响了酶分子、底物分子和ES复合物的解离状态。(2)过高、过低的pH导致酶蛋白变性。5)、激活剂对酶反应速度的影响酶的激活剂1.无机离子（1）一些金属离子，如Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+等。（2）阴离子：如Cl-、Br-、I-、CN-等（3）氢离子凡能提高酶活力的

7、物质都是酶的激活剂。如：Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。2.有机分子还原剂：抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽金属螯合剂：EDTA激活酶原的酶6)、抑制剂对酶活性的影响使酶的活性降低或丧失的现象，称为酶的抑制作用。能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。抑制剂并非变性剂，抑制剂具有不同程度的选择性。酶的抑制剂一般具备两个方面的特点：a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。b.能够与酶以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。抑制剂类型和特点竞争性抑制剂可逆抑制剂非竞争性抑制剂反竞争性抑制剂非专一

8、性不可逆抑制剂不可逆抑制剂专一性不可逆抑制剂抑制作用的类型：(一)不可逆抑制作用：抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。抑制胆碱酯酶活性，使乙酰胆碱不能被分解成乙酸和胆碱，引起乙酰胆碱的积累，使神经处于过渡兴奋状态，因此此类化合物又称神经毒气。有机磷化合物：抑制蛋白酶或酯酶活性敌敌畏敌百虫萨林有机砷化合物：与酶的巯基结合而抑制活性