《过柱纯化》PPT课件

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1、6、电泳、割胶、纯化DNA1、实验目的：(p140)将所需要的DNA片段进行回收，纯化。（TaKaRa公司凝胶回收试剂盒）2、实验原理：实验操作1.在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率*。2.切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。3.称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以1mg=1µl进行计算。4.向胶块中加入胶块融化液DR-IBuffer，DR-IBuffe

2、r的加量如下表：5.均匀混合后75℃加热融化胶块(低熔点琼脂只需在45℃)，间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。*切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。6.加入DR-IBuffer量的1/2体积量的DR-IIBuffer，均匀混合。7.将溶液转移至SpinColumn中，12,000rpm离心1分钟，弃滤液(可重复一次，提高DNA回收率)。8.将500µl的RinseA加入SpinColumn中，12,000rpm离心30s，弃滤液。9.将700µl的RinseB加入Spi

3、nColumn中，12,000rpm离心30秒，弃滤液。10.重复操作步骤9，然后12,000rpm再离心1分钟。11.将SpinColumn安置于新的1.5ml的离心管上，在SpinColumn膜的中央处加入25µl的灭菌蒸馏水*，室温静置1分钟*。12.12,000rpm离心2分钟洗脱DNA。*把灭菌蒸馏水加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。mark未纯化前质粒DNA未纯化前质粒DNA未纯化前PCR产物