《细菌基本检验技术》PPT课件

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1、实验一细菌检验基本技术(三)目的掌握观察菌落的方法，了解细菌在液体、半固体培养基的生长表现及意义。掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的制备。掌握细菌和基本形态和特殊结构。【器材】显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、酒精灯等细菌染色标本的制作程序涂片干燥固定染色染色方法革兰染色法（Gramstain）芽胞染色法（sporestain）革兰染色法（Gramstain）方法（改良快速法）初染：结晶紫＋等量NaHCO33～5s，水洗媒染：碱性碘液3～5s，水洗脱色：丙酮酒精3～5s，水洗复染：碱性稀释复红3～5s，水洗结果紫色：革兰阳性菌红色：革兰阴性菌芽胞染色法

2、（sporestain）方法：涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染3～5min→水洗→0.5%沙黄1min→水洗、晾干、油镜检结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。影响因素染色关键：脱色时间的长短其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液质量控制革兰阳性菌——金黄色葡萄球菌ATCC25923革兰阴性菌——大肠埃希菌ATCC25922三、拉丝试验原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使菌液呈粘性。方法：结果：有丝出现（拉丝试验＋）——革兰阴性菌无丝出现（拉丝试验－）——革兰阳性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌【注意事项】1.每次取

3、菌前后注意将接种环灭菌。2.涂片薄而均匀，干燥时注意勿将标本烤枯，不要忘记标本的固定。3.革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须严格把握脱色时间。4.选用培养18~24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰阳性菌转呈阴性反应。