细菌学检验基本技术

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1、细菌学检验细菌学检验基本技术1许欣第一节样本的采集与送检在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气，各种物品）、正常人体及临床等的样本。2许欣一、临床样本的采集与送检（一）血及骨髓样本的采集1.采样时间：发热期、用药之前、病情发展2.采样部位及频率：多部位、高频率3.样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量，分别作双相培养(37℃/28℃)。骨髓1ml～2ml。4.样本的

2、送检：尽快，室温5.注意事项：同时需氧和厌氧培养3许欣一、临床样本的采集与送检（二）尿液样本的采集1.采样时间：晨尿、用药前2.采样方法：10ml，中段尿、肾盂尿、导尿3.注意事项：无菌操作，用药前（三）粪便样本的采集1.采样时间：急性期、新鲜粪便2.采样方法：自然排便、直肠拭子、Cary-Blair运送培养基或pH7.0的甘油PBS3.注意事项：无菌操作、可能厌氧培养4许欣一、临床样本的采集与送检（四）痰及上呼吸道样本的采集1.采样时间：晨痰、鼻咽拭子2.采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、气管穿刺法等；

3、咽拭子3.注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存5许欣一、临床样本的采集与送检（五）其它临床样本化脓和创伤样本：棉拭子脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液等：穿刺生殖道：棉拭子组织样本：内镜炎症或组织坏死部位：手术6许欣二、食品卫生细菌学检验样本（一）样品采集原则注意代表性，防止样品受污染、变质和细菌生长大样(一整批)、中样(混合200g)和小样(检样25g)（二）样品采集方法无菌用具、包装完好、混合、震摇、冷冻、冷藏（三）采样的数量根据食品种类的不同，采样的数量也应不同（四）注意事项3h内送实验室，

4、无菌操作7许欣三、化妆品细菌学检验样本（一）采样数量每批两个大包装抽取4个包装，10g或10ml（二）样本的处理1.液体样品：10倍稀释，油性物用液体石蜡、土温-802.膏霜乳剂样品：亲水性-玻璃珠，疏水性-先行乳化3.固体样品的处理：均质后取上清液（三）样品送检原则及注意事项1.维持样品污染原状（出厂污染状态）2.去除残留防腐剂及抑菌剂（吐温-80和卵磷脂）3.注意事项（室温存放，多项目时先做微生物）8许欣四、生活饮用水细菌学检验样本（一）水样采集许多水体随时间和空间会发生很大变化，要采集具有代表性的样品，必须定出合理

5、的采样规划。（二）采样点的选择注意样品的代表性，河水、湖水、地下水、自来水（三）采样器具采样瓶、自动采样器、容器可加硫代硫酸钠（四）样品送检及注意事项4h内检验、可冷藏9许欣五、消毒及卫生用品（一）医疗卫生机构消毒及卫生用品物表：5cm×5cm灭菌规格板，100cm2区域空气：高度150cm、距墙100cm；面积≤30m2，设一条对角线上内、中、外3点；面积＞30m2，设4角及中央5点，暴皿5min；或用采样器手/皮肤粘膜：含中和剂棉拭子，5cm×5cm规格板医疗用品：破坏、棉拭子消毒剂：1ml加至9ml中和剂中10许欣

6、五、消毒及卫生用品（二）一次性使用的卫生用品同一批号3个运输包装中至少随机抽取12个最小包装量；1/4用于检测、1/4用于留样、2/4就地封存准备复测。11许欣六、空气样本平板沉降法和采样器采集法（一）空气微生物采样器分类按照采样方式的不同可分为两类(Ⅰ和Ⅱ类)，Ⅰ类是将微生物直接采到固体培养基上(如Andersen采样器)，Ⅱ类是把微生物先采到液体或其它介质上，再转种到培养基或细胞上显示(如Porton采样器)。12许欣六、空气样本按照流量的有效数字分，3位数以上为大流量(≥500L/min)，2~3位数为中流量(49

7、9L/min～11L/min)，1位数为小流量(≤10L/min)。按照采样器所用介质性质又可分为固体及液体采样器。按采样器的工作原理可分为六种：撞击式、沉降式、过滤式、静电吸附式、旋风式和离心撞击式采样器。13许欣六、空气样本（二）空气中细菌等微生物采样的介质采样介质(包括培养基)对细菌等微生物具有支撑、黏附、保护和生长作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白)（三）空气中细菌等微生物采样方法及送检1.平板沉降法：参见医院空气采样规定。2.空气采样器采样：常用Anderse

8、n采样器14许欣第二节细菌的形态结构检查法了解标本中有无细菌及其大致的数量。验证培养物是否为纯种。形态检查结果可做初步诊断。不染色检查法和染色检查法。借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。15许欣一、显微镜检查1、普通光学显微镜(lightmicroscope)：分辨率0.2μm，用于细菌染色标本的观察。2、