《细胞拆合与重组》PPT课件

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1、4.6动物细胞核移植4.6.1克隆的概念4.6.2鱼类、两栖类的细胞核移植4.6.3哺乳类的细胞核移植4.6.4克隆技术的应用与意义4.6.5正确看待克隆技术4.6.6克隆动物的现状和发展趋势4.6.1克隆Clone:指遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体。在不发生突变的情况下，它们应该有相同的遗传结构。Cloning:通过克隆方式生产克隆群体的过程或手段。克隆技术，无性繁殖的操作过程（动词）无性繁殖群体（名词）含义外延无性繁殖的（产物）（形容词）4.6动物细胞核移植1997年3月，世界卫生组织克隆——遗传上同一机体或细胞系（株）的无性生殖。DNA分

2、子、基因片断、单克隆抗体的复制也认为是克隆。4.6动物细胞核移植全能性(Totipotency)细胞全能性指已经分化了的和尚未分化的细胞具有发育成完整有机体的各种组织的潜在能力的性质。4.6动物细胞核移植分化细胞之全能性已分化细胞的细胞核，仍能像胚胎细胞般，含有引导生物完全发育的所有遗传讯息。分化细胞之全能性该如何重新启动？4.6动物细胞核移植4.6.2鱼类、两栖类的细胞核移植1952年，美，RobertBriggs和T.J.King利用两栖类卵细胞建立细胞核移植技术RobertBriggs4.6动物细胞核移植1955豹蛙(Ranapipiens)囊胚细胞核去核卵母细胞蝌蚪可育

3、的蛙4.6动物细胞核移植1958-1962年，英,JohnGurdon和Machineer爪蟾小肠上皮细胞核移植到未受精的卵细胞中，培养出可育的爪蟾4.6动物细胞核移植4.6动物细胞核移植4.6动物细胞核移植1970年,JohnGurdon用青蛙作材料脚蹼角质化细胞进行细胞核移植试验，蛙卵发育成了蝌蚪4.6动物细胞核移植4.6动物细胞核移植中国鱼类、两栖类动物克隆历史1961年，金鱼和镑铍鱼，鱼类不同亚科间的细胞核移植童第周1978年，黑斑蛙成体红细胞的细胞核移入去核的未受精卵中，发育成正常的蝌蚪4.6动物细胞核移植1978黑斑蛙(童第周)蛙红细胞核去核未受精卵细胞蝌蚪4.6动

4、物细胞核移植1979年，中国科学院武汉水生生物研究所两尾幼鱼鲫鱼囊胚期细胞385天59代连续传代培养细胞核同种鲫鱼的未受精卵4.6动物细胞核移植1989年，童第周、牛满江鲫鱼胚胎细胞核移入鲤鱼去核的未受精卵实现了不同种间的核质杂交。培育出草鱼核+团头鱼质的杂种鱼4.6动物细胞核移植4.6.3哺乳类的细胞核移植艰难曲折过程——卵细胞体积小鼠——80μm兔——125μm牛——140μm人——100μm4.6动物细胞核移植显微操作仪（micromanipulator)4.6动物细胞核移植1977年，美国，杰克逊实验室“亚无性繁殖”——单亲小鼠卵细胞受精精卵核融合前，去精核双核卵细胞双

5、核融合，细胞分裂胚胎移入母鼠子宫7只单亲小鼠4.6动物细胞核移植1981年，Illmensee和Hoppy首次小鼠卵移核实验成功4.6动物细胞核移植Illmensee&Hoppe的克隆小鼠实验收集囊胚期细胞团分散成单细胞细胞核受体细胞核供体收集受精卵去核融合甲品种小鼠乙品种小鼠取核融合4.6动物细胞核移植将核注入已去核的受精卵中在培养皿中培养至细胞团植入假母子宫产出小鼠核移植小鼠（克隆小鼠）长成成鼠，呈核供体小鼠性状克隆小鼠实验步骤供体胚胎细胞核的制备受体受精卵的制备细胞核移植克隆鼠的培养4.6动物细胞核移植A.供核胚胎的制备取纯系灰色小鼠作核供体亲鼠，正常交配妊娠第4天，从雌

6、鼠中收集胚泡，去透明带，使内细胞团与滋养层分离；将内细胞团和滋养层细胞分散成单个细胞。采用妊娠第4天的小白鼠胚胞，放入加有5ug／ml的脱氧核糖核酸酶，1O毫克分子的N-2羟乙基对二氮己烷-N-2乙烷磺酸，10％牛胎儿血清Darbeco改良Eagle氏液(DMEM)培养，除去透明带，甩针分离营养细胞和内细胞团的细胞体，将这些细胞分离，再将分离的细胞移到加有10％牛胎儿血清(DMEM)液中培养，保存在含有细胞松驰素B培养液中待用。4.6动物细胞核移植B.受体受精卵的制备从C57BL/6品系的黑色小鼠中收集受精卵核移植的卵子从输卵管壶腹部采取受精卵，放入加有1毫克／毫升的牛睾丸玻璃

7、酸酶Whitten氏培养液内，经5-10min除去卵丘层细胞，再放进加有5ug/ml的细胞松驰素B的Whitten石腊培养液中培养1h，待用4.6动物细胞核移植C.细胞核移植用8μm的微玻璃吸管插入受精卵将原来的雌、雄核两核吸出用微细管插入胚胎单细胞中把核吸出，然后移入刚刚受精的黑色纯系核受体亲鼠受精卵这些核移植卵在新的whitten氏液内培养4-5d，发育到桑椹期或胚泡初期4.6动物细胞核移植D.克隆鼠的培养植入ICR品系的白色假孕小鼠子宫内着床发育产下仔鼠（全部与CBA/HT-6一样的灰