《生物制品的制备》PPT课件

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1、第三章生物制品的制备（Preparation）第一节一般生物制品的制备方法(Preparationofgeneralbio-preparate)一、生物制品原料的选择、预处理与保存方法（Selection、pretreatmentandpreservationofrawmaterialofbiopreparate）（1）原料选择原料的选择原则：①有效成分含量高，新鲜；②原料来源丰富，产地较近；③原料中杂质含量少；④原料成本低等。原料的选择注意事项：①植物原料生长的季节性；②微生物原料的对数期；③动物原料的年龄与性别。（2）原料的预处理与保存：①动物原

2、料：采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。②植物原料：要择时采集并就地去除不用的部分，保鲜处理；③微生物原料：要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。原料的保存方法主要有：①冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。二、生物制品的提取（extraction）(1)生物组织与细胞的破碎（obtrudeoftissueandcell）：

3、生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要提高提取率，破碎过程是非常重要的。常用的破碎方法：①磨切法，该法属于机械破碎方法，设备有组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。②压力法，有加压与减压两种，常用的法兰西压釜使用效果良好。③反复冻融法，设备简便，活性保持好，但用时较长。④超声波振荡破碎法，该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。⑤自溶法或酶解法，用得较少。（2）提取（extraction）生物组织与细胞破碎后要立即进行提取。提取时，首先要根据活性物质的性质，①选择提取试剂。提取试剂主要有：水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机

4、溶剂（如氯仿、丙酮等）。②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。三、分离纯化的基本过程四、分离纯化的基本技术(1)分离纯化技术应满足的要求①技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性；②选择性要好，能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来，达到较高纯化倍数；③收率要高；④两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整；⑤分离纯化过程要快，能够满足高生产率的需求。2.细胞破碎与固液分离（1）细胞收集常用离心分离的方法；膜过滤法也逐渐得到广泛应用。（2）细胞破碎有机械破碎法和非机械破碎法。（3）固液分

5、离分离细胞碎片是比较困难的，可以用离心、膜过滤或双水相分配的方法，使细胞碎片分配在一相（通常为下相）而分离，同时也起部分纯化作用。3.目的产物的分离纯化分离纯化主要依赖色谱分离方法。色谱技术是下游精制阶段的常用手段，该法优点是具有多种多样的分离机制，设备简单，便于自动化控制和分离过程中无发热等有害效应。色谱技术分为离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱等。第二节各类生物制品的分离纯化方法蛋白质核酸糖类脂类氨基酸一、蛋白质类制品的分离纯化方法（Isolationanddepurationofproteinproducti

6、on）包括蛋白质、多肽和酶类等药物。分离纯化方法有：(1)沉淀法（precipitation）：蛋白质、酶的初步纯化往往用沉淀法。原理是使蛋白质胶体颗粒破坏，从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法（saltingout）、有机溶剂沉淀法（organicsolventprecipitation）、等电点沉淀法（isoelectricprecipitation）、与靶物质结合沉淀法（如抗体—抗原）（targetbandingprecipitation）等。(2)按分子大小分离的方法：有超滤法（ultrafiltration）和透折法（dialysis）（即膜分离

7、方法）、凝胶层析法（gelchromatography）、超速离心法（ultracentrifugation）等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。(3)按分子所带电荷进行分离的方法氨基酸、多肽、蛋白质、酶均为两性电解质。它们具有等电点，在离开等电点的pH时便会带正或负电荷。例如某蛋白质等电点为7.0，当溶液pH为4.0时，分子则带有正电荷。由于具有该性质，利用带电性质进行分离是极其有效的方法。利用电学性质进行分离的方法有离子交换柱层析法（ion-exchangechromatography）、电泳法（electrophoresis

8、）、等电聚焦法（isoelectricfocusing）等。（4）亲和层析法（affinitychromat