《生物制品的制备》PPT课件

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1、第二章生物制品的制备（Preparation）第一节一般生物制品的制备方法(Preparationofgeneralbio-preparate)一、生物制品原料的选择、预处理与保存方法（Selection、pretreatmentandpreservationofrawmaterialofbiopreparate）（1）原料选择原料的选择原则：①有效成分含量高，新鲜；②原料来源丰富，产地较近；③原料中杂质含量少；④原料成本低等。原料的选择注意事项：①植物原料生长的季节性；②微生物原料的对数期；③动物原料的年龄与性别。（2

2、）原料的预处理与保存：①动物原料：采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。②植物原料：要择时采集并就地去除不用的部分，保鲜处理；③微生物原料：要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。原料的保存方法主要有：①冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。二、生物制品的提取（extraction）(1)生物组织与

3、细胞的破碎（obtrudeoftissueandcell）：生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要提高提取率，破碎过程是非常重要的。常用的破碎方法：①磨切法，该法属于机械破碎方法，设备有组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。②压力法，有加压、减压、渗透压三种③反复冻融法，设备简便，活性保持好，但用时较长。④超声波振荡破碎法，该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。⑤自溶法或酶解法，用得较少。（2）提取（extraction）生物组织与细胞破碎后要立即进行提取。提取时，首先要根据活性物质的性质，①

4、选择提取试剂。提取试剂主要有：水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂（如氯仿、丙酮等）。②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。三、蛋白质类制品的分离纯化方法（Isolationanddepurationofproteinproduction）包括蛋白质、多肽和酶类等药物。分离纯化方法有：(1)沉淀法（precipitation）：蛋白质、酶的初步纯化往往用沉淀法。原理是使蛋白质胶体颗粒破坏，从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法（saltingout）、有机溶剂沉淀法（organics

5、olventprecipitation）、等电点沉淀法（isoelectricprecipitation）、与靶物质结合沉淀法（如抗体—抗原）（targetbandingprecipitation）等。蛋白质中性盐中和电荷水化层减弱溶解度下降，沉淀盐析法原理等电点沉淀法在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。(2)按分子大小

6、分离的方法：有超滤法（ultrafiltration）和透折法（dialysis）（即膜分离方法）、凝胶层析法（gelchromatography）、超速离心法（ultracentrifugation转速大于20000r/min）等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。凝胶层析又称分子筛层析，主要根据混合物中分子的大小和形状不同 ，在通过凝胶时，分子的扩散速率各异而达到分离的目的。凝胶颗粒具有多孔性网状结构，小分子易进入凝胶网孔，流程长而移动速度慢，而大分子物质不能进入凝胶网孔，沿凝胶颗粒间隙流动，流程短

7、移动快。这种现象称为分子筛效应。(3)按分子所带电荷进行分离的方法氨基酸、多肽、蛋白质、酶均为两性电解质。它们具有等电点，在离开等电点的pH时便会带正或负电荷。例如某蛋白质等电点为7.0，当溶液pH为4.0时，分子则带有正电荷。由于具有该性质，利用带电性质进行分离是极其有效的方法。利用电学性质进行分离的方法有离子交换柱层析法（ion-exchangechromatography）、电泳法（electrophoresis）、等电聚焦法（isoelectricfocusing）等。（4）亲和层析法（affinitychrom

8、atography）大部分生物活性物质都有其作用的靶物质，如酶与底物（或抑制剂）、抗原与抗体、激素与受体等，它们之间有特异的亲合作用，利用该性质设计的特异层析分离技术称为亲和层析。亲和层析分离专一性强，操作简便，是当前应用很广泛的分离方法之一。亲和色谱（affinitychromatography）1）基本概念（ba