流式细胞术临床应用的建议

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1、万方数据主堡捡墅匿堂苤查!Q!i生!!旦釜堑鲞笠!!塑些垫』!生丛四：旦!!!坐!竺!!!!：!!!：!!：盟!：!!流式细胞术临床应用的建议中华医学会检验医学分会卫生部临床检验中心中华检验医学杂志编辑委员会流式细胞术(flowcytometry，FCM)检测的项目不断地由科研推向临床应用领域，并在临床免疫学、血液系统疾病的诊断、治疗与复发监测方面起到不可或缺的作用。FCM在临床检验诊断中的作用越来越重要，国内开展FCM的医疗机构也越来越多，但仍存在着诸多问题，总体水平有待进一步提高。目前临床尚缺乏统一的FCM应用指导原则。为了科学、合理地将

2、FCM应用于临床疾病的筛查、诊断、疗效监测、预后评估、复发预测等环节，中华医学会检验医学分会，卫生部临床检验中心和中华检验医学杂志编辑委员会共同决定制定FCM的临床应用建议。本应用建议在制定过程中，主要参考了美国临床和实验室标准协会(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute，CLSI)和欧洲临床细胞分析协作组(EuropeanWorkingGrouponClinicalCellAnalysis，EWGCCA)等’1。3o学术组织关于流式细胞学临床应用的相关文件，并通过多种方式广泛征求临床血液学专家和检验医

3、学工作者的意见，作为修改该建议的一个重要参考依据。本应用建议最后经中华医学会检验医学分会和卫生部临床检验中心组织专家进行讨论修改后，由中华医学会检验医学分会、卫生部临床检验中心和中华检验医学杂志编辑委员会共同发布。由于医学科学技术发展迅速，本应用建议将适时修订，以适应医学发展和临床应用的需要。第一部分FCM临床应用的质量控制FCM是一种利用流式细胞仪对单细胞或生物颗粒进行多参数、快速分析的技术。目前，FCM越来越广泛的应用到I临床检验中，在疾病的诊断、分型、治疗、预后及预防起到重要作用Ⅲ3。由于具有DOI：10．3760／cma．j．issn

4、．1009-9158．2013．12．003基金项目：国家临床重点专科建设项目资助课题通信作者：沈立松(200092上海交通大学医学院附属新华医院检验科)。电子信箱：isongshen@hotmail．tom．指南与共识．多参数和多变量的特点，流式细胞仪的性能状态、检验方法、试剂性能与组合搭配、检测人员专业水平等都直接影响着检验报告的质量。一、流式细胞仪的校准与性能监测使流式细胞仪处于最佳光学性能状态是FCM临床应用的技术保证。流式细胞仪应定期进行仪器设置校准，仪器性能指标如仪器的散射光、荧光检测灵敏度和分辨率以及荧光补偿等需定期监测，并做好

5、记录。1．调整光路，规范光路设置：每次开机时，用光路质控微球验证仪器的光路，用电压校准微球调整前向角散射光(forwardscatter，FSC)和侧向角散射光(sidescatter，SSC)及光电倍增管(photomultipliertube，PMT)电压和增益。固定电压后，连续5d测定荧光微球在每个光学检测通道的平均通道数和变异系数(coefficientofvariation，CV)，每天不同时间点测定4次，然后计算出这些参数的均数及标准差(SD)，以均值±2SD为可接受范围。每天需记录平均通道数及CV，并与其对应的可接受范围进行比较

6、E7-8]。2．荧光的检测灵敏度和分辨率：在保持激光强度、滤光片、PMT电压和增益不变的情况下，测定并记录校准荧光微球上机测定获得的平均通道数和CV。要求所有光学检测通道所使用的荧光参数为均质峰。通过连续5d、共20次重复测定得到每一种荧光微球的可接受平均荧光强度范围。应确保流式细胞仪每个荧光检测通道都能将弱表达峰和自发荧光峰区分开。l建议1临床FCM实验室需对仪器硬件性能进行l经常性监测并做好记录。应要求流式细胞仪的供l应商定期对仪器性能参数进行校准。f建议2每次开机使用质控样品对仪器性能进行I验证，包括仪器光学系统、荧光分辨率及荧光强度J

7、等。3．荧光补偿：正确的荧光补偿对于FCM至关重要。根据多色分析实际采用的荧光染料种类和数万方数据史堡堕堕匿皇苤盍!!!!至!!旦笙!i鲞笠!!塑些i!』堕!丛鲴：旦!!!堕!笪垫!!：∑!!：堑：盟垒!兰量，合理进行补偿设置’9J。目前可以用商品化的标准补偿试剂来完成多色荧光补偿，但补偿设置应尽量使用细胞样本等生物样品。1⋯。目前多数流式细胞仪都可进行自动补偿，但自动补偿设置好后，仍需根据实际染色方案如不同的荧光抗体、不同的标本处理步骤、阳性细胞群的选择等进行必要的调整。在补偿设置中设立正确的对照管是非常必要的。在多参数FCM分析时，推荐采

8、用荧光缺一对照(fluorescence．minus．onecontrol，FM0)，即标记除某一通道荧光抗体外的其他所有通道荧光抗体旧j。通过FMO管可以更准确设