实验十八豆科植物根瘤根瘤细菌的形态观察及其分离

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1、实验十八豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离2021/8/5豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离目的要求实验材料实验程序思考题目的要求观察几种豆科植物的根瘤和根瘤细菌的形态。掌握从根瘤中分离根瘤细菌的方法及培养的方法实验材料不同豆科植物新鲜标本数株，不同豆科植物的浸制标本。加入结晶紫的根瘤菌培养基（10mL）。无菌培养皿、接种环、1mL无菌水、2mL无菌水、手术剪、无菌玻棒、载玻片、镊子、酒精灯、显微镜、二甲苯、香柏油、擦镜纸。0.1%升汞液。革兰氏染色液一套。实验程序观察豆科植物根瘤和根瘤细菌的形态。分离豆科植物根瘤菌实验程序Ⅰ（

2、观察豆科植物根瘤和根瘤细菌）观察几种豆科植物根部根瘤的形状、色泽、以及着生部位，识别有效根瘤和无效根瘤，或观察几种豆科植物浸制标本的根瘤形状，并绘图。观察根瘤细菌的形态：用镊子取根瘤1个，洗净后放在洁净的载玻片上，加蒸馏水1滴，然后再用另一洁净载玻片在这根瘤上轻轻压出根瘤中的汁液，再取此汁液用接种环涂片，（亦可用分离到的根瘤菌悬液涂片），用简单染色法染色，油镜下观察并绘图。实验程序Ⅱ（分离豆科植物根瘤菌）选择1株生长健壮的豆科植物，在主根部位选择1个红润饱满的较大根瘤，连同1小段根剪下，以免损伤根瘤，用清水洗净。将根瘤浸泡在75%酒精的无菌

3、培养皿中，5min后，用镊子将根瘤转入盛有%升汞（HgCl2）溶液的无菌培养皿中浸泡2—3min，以杀死根瘤表皮附着的杂菌，消毒时间一到，马上用无菌镊子将根瘤转入盛有无菌水的培养皿中，用镊子翻动几次，然后用镊子挟起根瘤，再用无菌水冲洗几次，洗去残存的升汞液。将已消毒的根瘤放入装有1mL无菌水的试管中，用无菌玻棒轻轻挤压根瘤，制成根瘤菌悬浊液备用。实验程序Ⅲ（分离豆科植物根瘤菌）取已融化的根瘤菌培养基以无菌操作制成平板（2付培养皿）待用。取上面已凝固的根瘤菌平板，用接种环在无菌操作下取一环根瘤汁液进行分离（连续划线或分区划线）。倒置28~30

4、0C培养。一般快生型根瘤菌（蚕豆、豌豆、苜蓿、三叶草、紫云英根瘤菌）培养3—5d，慢生型根瘤菌（大豆、花生、豇豆）培养7—10d即可长出菌落。观察菌落形态，并进行描述；选取典型菌落进行涂片，革兰氏染色，油镜下观察并绘图。将典型的单菌落转接到斜面培养基上，得到根瘤菌纯种，用作菌种保藏。如不纯，应再次划线分离。思考题分离根瘤菌时，为什么要进行根瘤表面的消毒？为什么有效根瘤往往生长在主根上？并呈粉红色？实验十八结束2021/8/5