实验一 细胞的形态观察及其大小测量

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1、实验一细胞的形态观察及其大小测量【实验目的】1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。【实验用品】普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。【实验材料】人肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。【实验内容和方法】(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察（1）鼠肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。（2）鸡血细胞涂片的观察：注

2、意观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。2、植物细胞的观察（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。（2）洋葱表皮细胞的形态观察：用镊子撕取洋葱表皮，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。在显微镜下观察的形态和结构。（二）细胞的大小和测量1、测微尺的使用目镜测微尺是一块圆形玻片，中心刻有一尺，长5～10mm，分成50～100格。每格的实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。镜台测微尺是在一块载玻片中央，用树胶封固一圆形的测微尺，长1mm或2mm，分成100格或200格，每格的实际长度0.01mm(10μm)。当用目镜测微尺

3、来测量细胞的大小时，必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。方法如下：(1)卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。(2)将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。(3)小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(如图所示)。(4)记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：0123测定目镜测微尺每格实长的图解上尺：目

4、镜测微尺；下尺：镜台测微尺镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数=—————————×10目镜测微尺的格数例如，图中镜台测微尺1格=目镜测微尺6格，代入公式得：目镜测微尺每格=1／6×10μm=1.66μm(5)取下镜台测微尺，换上需要测量的玻片标本，用目镜测微尺测量标本。2、计算：根据测量结果计算各种细胞及细胞核的体积。椭球形：V=4πab2／3a-长半径b-短半径圆球形：V=4／3πr3r-半径圆柱形：V=πr2hr-半径h-高【作业与思考】1、血细胞分为哪几大类？分别描述你看到的不同血细胞的形态，并阐述其功能。绘图。2、任意选择你所看到的动物细胞

5、和植物细胞各一个，绘图并进行适当标注，测量其大小，并比较动植物细胞大小的差异。3、在不同的放大倍数下，所测得的细胞大小一致吗？你认为在哪个放大倍数下测定得比较准确？为什么？实验二PEG法诱导细胞融合【实验目的】1.了解细胞融合的原理和过程；2.初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。【实验原理】细胞融合，即在自然条件下或利用人工法(生物的、物理的、化学的)，使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。由于不仅同种细胞可以融合，种间远缘细胞也能融合，甚至于动植细胞也能合二为一，因此细胞融合技术目前较广泛应用于细胞生物学、遗传学和医学研

6、究等各个领域，并且取得显著的成绩。化学融合方法一般使用聚乙二醇(PEG)诱导细胞在体外进行融合。商品PEG的相对分子质量有200-6000范围内的各种规格，它们均可用作细胞融合剂。普遍认为PEG分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。促进细胞融合的效力，必须采用较高浓度的PEG溶液，但在高浓度PEG溶液下，细胞可能因脱水而受到显著的破坏。因此，选择合适的PEG分子量，浓度及作用时间是PEG融合技术的关键。该方法的优点是：操作简单，容易获得

7、融合体，融合效果好。细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。【实验用品】1．器材:离心机、显微镜、天平、水浴锅、滴管、5ml离心管、烧杯、盖玻片、载玻片。2．材料：鸡血悬液。3．试剂：1）0.85%的生理盐水；2）GKN液：8.0gNaCl，0.4gKCl,1.77gNa2HPO4.2H2O，0.69gNaH2PO4.2H2O，2.0g葡萄糖，0.01g酚红，溶于1000mL重蒸水中。3)50%（m/V）PEG（43℃温浴）：取50gPEG（相对分子质量＝400

8、0）放入100ml瓶中，高压灭菌20min。让PEG冷却至50～60℃，勿让其凝固。加入50m