实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定

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1、酵母核糖核酸的分离及组份鉴定实验七一实验目的1.了解并掌握稀碱法提取RNA的基本原理及方法。2.了解RNA的化学组成及定性鉴定的原理与操作过程。二实验原理实验室：工业生产：核酸提取方法（有活性的）（无活性的）苯酚法去污剂法盐酸胍法稀碱法---本实验浓盐法组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵

2、母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。二实验原理酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。酵母中的核糖核酸可溶于碱，在碱提取液中加酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此得到粗核糖核酸。核糖核酸含有核糖，嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。二实验原理鉴定方法：(1)磷酸与定磷试剂作用能产生蓝色的钼蓝沉淀。(2)核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。(3)嘌呤碱与硝酸银产生白色的嘌呤银化合物沉淀。嘌呤碱

3、的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易于水解二实验原理仪器：试管；试管架；烧杯；移液管；量筒；滴管；水浴锅；离心机；离心管；锥形瓶。原料：干酵母粉试剂：（1）0.04mol／L氢氧化钠溶液；（2）酸性乙醇溶液；（3）1.5mol／L硫酸；（4）0.1mol/L硝酸银溶液；（5）1mol/L浓氨水；（6）三氯化铁-浓盐酸溶液；（7）苔黑酚乙醇溶液；（8）抗坏血酸；（9）钼酸铵试剂。三仪器、原料和试剂四操作步骤（一）酵母RNA的提取（1）将2g酵母悬浮于10ml0.04mol／L氢氧化钠溶液中；（2）在沸水浴上加热30分钟后，将匀浆液转移至10ml离心管

4、中，冷却。配平离心(3000r／min)15分钟；（3）将上清液缓缓倾人盛有4ml酸性乙醇溶液的另一10ml离心管中。注意要缓缓倾入，且用胶头吸管吹匀；（4）离心(3000r／min)3分钟，弃去上清液；四操作步骤（二）RNA成分的鉴定在沉淀中，加入1.5mol／L硫酸溶液3ml，在沸水浴中加热至少10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。（1）戊糖：取1支试管加入水解液5滴、三氯化铁浓盐酸溶液10滴和苔黑酚乙醇溶液2滴。用木夹夹好后放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。（2）嘌呤碱：在1支干净试管内加入水解液5滴，再逐滴加

5、入15滴氨水，然后加入约5滴硝酸银溶液，放置片刻，观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。（3）磷酸：取1支试管，加入水解液10滴和定磷试剂10滴。在水浴中加热，观察溶液颜色变化，溶液变蓝色，说明磷酸的存在。五思考题1、如何得到高产量RNA的粗制品？2、本实验RNA组分是什么？怎样验证的？