基因操作原理display基因展示技术

《基因操作原理display基因展示技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、以微生物细胞表面展示为主线的基因操作原理2004年4月22日星期四通常是指通过遗传操作将外源大分子定位表达在微生物细胞表面以便直接利用全细胞进行后续工作而无须基因产物的提取、纯化、和重新折叠等操作一、微生物细胞表面展示Microbialcellsurfacedisplay,MCSD微生物细胞表面展示第一部分MCSD主要以构建融合蛋白方式来实现即将外源蛋白与菌体的某一表面蛋白相融合借助后者的表面识别和表面定位功能将前者携带并定位在细胞表面前者称为乘客蛋白，后者称为运载蛋白即将外源蛋白与菌体的某一表面蛋白相融合借助后者的表面识别和表面定位

2、功能将前者携带并定位在细胞表面前者称为乘客蛋白，后者称为运载蛋白宿主菌细菌和酵母菌展示了病原菌的抗原表位、多聚组氨酸肽、蛋白质文库、金属硫蛋白、多种酶类、多种单链抗体和T细胞受体的信号分子运载蛋白膜蛋白、附属结构蛋白、粘附蛋白、凝集素、以及S-层蛋白等宿主菌细菌和酵母菌展示了病原菌的抗原表位、多聚组氨酸肽、蛋白质文库、金属硫蛋白、多种酶类、多种单链抗体和T细胞受体的信号分子运载蛋白膜蛋白、附属结构蛋白、粘附蛋白、凝集素、以及S-层蛋白等二、微生物细胞表面展示技术的应用MCSD技术广泛应用于生物工程领域，可开发和利用来进行蛋白构象的分析

3、、活菌疫苗的研制、临床诊断、表面抗原的直接克隆、以及抗体工程应用等。1.构建和筛选蛋白质文库2.开发活菌体疫苗，制备抗血清和多克隆抗体3.构建全细胞催化剂4．开发新型微生物吸附剂5．研制新型生物传感器三、举例DisplayofPoly-HisPeptidesonEscherichiacoliCellSurface在大肠杆菌细胞表面展示多聚组氨酸肽SchematicPresentationofE.coliOmpCLQ位点含PstI位点GATAGATACCTGCAGGTCGACCCAAGCGGACATCACCATCATCACCATTCTG

4、GTCTCGAGGATATCCTGCAGTTGGCTATCTATGGACGTCCAGCTGGGTTCGCCTGTAGTGGTAGTAGTGGTAAGACCAGAGCTCCTATAGGACGTCAACCPoly(His)6XhoIPstIPstISalILQVDPSGSGLEDILQGATAGATACCTGCAGGTCGACCCAAGCGGACATCACCATCATCACCATTCTGGTCTCGAGGATATCCTGCAGTTGGCTATCTATGGACGTCCAGCTGGGTTCGCCTGTAGTGGTAGTAGTGGTAAGACC

5、AGAGCTCCTATAGGACGTCAACCGTCGACCAGCTGCTCGAGGAGCTCGTCGAGCAGCTCCTCGACGAGCTGSalIXhoIXhoIPstIPstISalISequenceInsertedintoOmpCL7ExpressionofOmpC-(6His)nat30CFractionofOmpCoritsderivatesofthetotaloutermembraneproteins123456ExpressionofOmpC-(6His)nat25CFractionofOmpCoritsderiv

6、atesofthetotaloutermembraneproteins12InteractionBetweenNeighboringHistidinesandNi-NTAAgaroseEachNi2+requiresixpairsofelectronstoformastablecoordinationspherearound;fourofthemareavailablefromNTA,andtwooftheothertwoareexpectedfromneighboringhistidines.NTA:nitrilotriacetic

7、acid次氮基三乙酸Ni-NTA-AgaroseSurfaceboundcellsof(a)MC4100(pTCHP2)and(b)MC4100(pTCHP3)AttachmenttoNi-NTA-Agarosebeads碘化丙锭染色细胞,543nm氦/氖激光，570nm光栅AttachmenttoNi-NTA-AgarosebeadspTCdPpTCHP1pTCHP2pTCHP12pTCHP6pTCHP3AllrecombinantcellscouldattachtothesurfaceofNi-NTA-AgarosePoly-Hi

8、speptideswereexposedsuccessfullybeads,exceptMC4100(pTCHP18)Cd2+AdsorptionofMC4100(pTCHPn)Theadsorptioncapacity