地贫的筛查诊断和治疗

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1、地中海贫血的筛查、实验诊断技术和治疗一、地中海贫血的筛查地贫筛查目的：诊断出所有携带地贫基因者，重型和中间型地贫易诊断，因此最主要的是查出不被重视的轻型地贫和静止型地贫基因携带者。正常人群地贫筛查步骤：首先是血细胞分析除了静止型α地贫基因携带者（α地贫2）外，MCV，MCH基本上都低于正常。国际地贫协会认为最广泛使用的地贫截断值：MCV<79flMCH<27pg其次是Hb电泳与HbA2检测β地贫：电泳法HbA2>3.5%高效液相法色谱法HbA2>4%α地贫与其它血红蛋白病：HbH病可见H区带，血红蛋白病可见相应异常区带。β地贫基因型与HbA2绝大

2、多数β地贫基因突变型的基因携带者HbA2均增高，我国主要的几种突变型（41-42，IVS-Ⅱ654，17，71-71）均为的β0，HbA2均增高。α地贫1：MCV<79fl，MCH<27pg，HbA2偏低。但α地贫2多无任何提示。新生儿脐血检测HbBart’s可诊断α地贫，这是α地贫筛查最经济而又简便的方法，在最基础的卫生院都能做到。有疑问可进行基因分析，可检测国内常见的17种β地贫基因突变，常见的3种α地贫基因缺失和常见的4种α地贫基因突变。二、地中海贫血诊断实验技术1.红细胞脆性试验（一管法）试剂：0.32%NaCL缓冲液（以1%NaCL缓冲

3、液32ml于100ml容器中，加入重蒸馏水至刻度。方法：取0.32%NaCL缓冲液2.5ml于小试管中，吸取全血10ul加入试管中，用吸管吸取溶液来回洗涤3次，再颠倒混匀，5分钟后观察结果。2.微量血红蛋白电泳设备：电泳仪，电泳槽试剂：浸醋纤膜用Tris缓冲液，电泳槽用硼酸缓冲液，丽春红染液溶血液制备：常用四氯化碳溶血法：去血浆→生理盐水洗杂质→蒸馏水溶血→四氯化碳溶解提取脂溶性物质→离心得Hb液。电泳：取膜条，加溶血液于阴极端，然后电泳20-30分钟。染色：取出膜条，丽春红染液，染数分钟，然后用3%醋酸溶液洗干净，可观察结果。3.血红蛋白A2

4、测定不连续电泳将HbA2分离后，分别剪出膜条中的HbA和HbA2区带，分别放入试管中，HbA加蒸馏水20ml，HbA2加4ml，浸泡30分钟，不定时摇动，使Hb完全冼脱下来后混匀，用721分光光度计以波长413nm蒸馏水校正零点，读取光密度OD值并计算出结果。4.抗碱血红蛋白测定设备：721分光光度计，刻度吸管，秒表，玻璃漏斗，滤纸。试剂：1/12mol/LKOH或NaOH溶液，酸性半饱和硫酸铵溶液。方法：取两支试管，测定管加入溶血液0.1ml，对照管加入0.02ml，于测定管中加入KOH1.6ml，摇匀，1分钟时立即加入酸性半饱和硫酸铵溶液

5、3.4ml，倒转6次，放10分钟，滤取溶液检测，用波长540nm蒸馏水校正零点，分别读取测定管和对照管光密度OD值，计算出结果。5.全自动电泳仪用于Hb电泳及HbA2和HbF测定目前国内使用的主要有▲美国生产的Helena电泳仪、扫描仪和分析系统。▲法国生产的Sebia电泳仪、扫描仪和分析系统。▲国产的金桑特电泳仪、扫描仪和分析系统。6.高效液相色谱仪用于地贫和血红蛋白病的检测国际地贫协会和美国化学学会推荐使用，直接测出HbA2和HbF值，6分钟左右出一个结果，变异系数小，准确可信，操作方便，结果判断简单，既可单个做也可成批大量做，一次可放100

6、个样品。已知血红蛋白病大多可有特别波型，易诊断。7.血细胞分析平均细胞体积（MCV）----79平均红细胞血红蛋白浓度（MCH）----27pg8.基因分析缺失型α地贫▲提取DNA▲PCR扩增▲PCR产物电泳分离非缺型α地贫β地贫和非缺失型α地贫▲提取DNA▲PCR扩增▲杂交▲洗膜▲显色结果分析：HbA2高于正常（1岁以），MCV，MCH低于正常为β地贫，Hb正常为携带者，低于正常为轻型。HbA2不高，MCV，MCH低于正常，有H带为中间型α地贫（HbH病），不贫血或轻度贫血应高度怀疑α地贫1（特别是HbA2较低者），应建议进行基因分析

7、明确诊断。三、地中海贫血的治疗1.重型β地贫患者的预期寿命●不输血的患儿期望寿命5岁，患儿常会出现包括不会走路，发生病理性骨折和面部畸形等严重症状，主要致死原因是贫血，肝功能损害，败血症和心衰。●不规则输血患儿期望寿命13-19岁，但生活质量极差，多死于长期贫血导致的心衰、败血症和肝功能损害。●规则高量输血但不用除铁剂期望寿命20岁以上。生活质量明显好于不规则输血，主要死因不再是贫血而是铁负荷过量所致的肝硬化、心衰和内分泌功能失调。●规则高量输血和使用除铁剂可长期存活。▄2.重型β地贫患者每月所花费用按体重20kg计算该患者每月：输红细胞2单位（

8、240ml）约540元注射除铁剂得斯芬30支约2100元合计2640元左右3重型β地贫推荐的输血方案●维持血红蛋白在100g/L以上方法