固定化生物催化剂反应过程动力学

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1、生物反应工程戚以政王炳武北京化工大学生命科学与技术学院第三章固定化生物催化剂反应过程动力学第一节固定化生物催化剂概论酶固定化的意义酶固定化的方法影响固定化酶反应动力学的因素均相酶反应系统的缺点酶随产物排出，无法重复使用；增加产物纯化难度；不稳定，易变性失活一、什么是固定化酶？通过物理或化学的方法使溶液酶结合在不溶于水的载体上，或被限制在有限空间内，能与反应液分离，保留在反应器内或能够被回收并反复利用，不溶于水但仍具有酶活力的酶固定化酶的优点容易从反应体系中分离可以重复使用机械强度和稳定性增加便于连续化、自动化生产固定化技术的发展固定化酶固定化细胞1916年Nelson和Griffin发现酵

2、母蔗糖酶能被骨炭粉末吸附并在吸附状态下仍具有催化活性，后来科学家开始了固定化酶的研究工作。首例工业化应用固定化酶是1969年由Chibata及其同事在日本TanakeSciyaku公司实现的，他们将米曲酶（Aspergillusoryzae）的氨基酰化酶固定后用于拆分合成的外消旋DL-氨基酸，得到相应的旋光性的对映体。二、酶的固定化方法载体结合法交联法包埋法1、载体结合法物理吸附法共价键法离子键法1）物理吸附法活性炭、硅胶、硅藻土、陶瓷。酶活收率高结合力弱，易脱落简便易行操作流程：将酶溶液溶解于缓冲液中，加入载体，振荡或者搅拌一定时间后，抽滤、洗涤、冷冻干燥，得到固定化酶。2）共价键法利用

3、氨基、羟基、胍基、咪唑基等反应活性高的未结合基团。易失活、酶活收率低结合牢固3）离子键法离子静电引力离子交换树脂操作简单酶活收率高结合力弱，易脱离2、交联法酶与具有两个或两个以上官能团的试剂反应戊二醛特点不需要载体反应剧烈，酶活收率低结合牢固3、包埋法将酶包埋在凝胶的微小格子或微胶囊等有限空间内聚丙烯酰胺凝胶、海藻酸钙、琼脂。特点包埋法只适合于底物和产物均为小分子物质的酶的固定化酶活收率高制备成本高概念：酶活力收率酶活力收率是指实际测定的固定化酶的活力(E3)与固定化时所用的全部游离酶的活力(E1+E2+E3)之比，包括因未固定化而损失的酶活(E1)概念：酶的活力表现率酶的活力表现率是指实

4、际测定的固定化酶活力(E3)与被固定化的酶在溶液状态时的总活力之比(E2+E3)三、酶固定化后的变化底物专一性的改变pH活性曲线和最适pH的变化稳定性的变化四、影响固定化酶动力学的因素酶结构的改变位阻效应分配效应扩散效应1、酶结构的改变2、位阻效应立体障碍与底物分子的大小、形状及性质有关。3、分配效应分配系数K=Csg/Csi4、扩散效应外扩散内扩散研究方法建立包括传质速率和酶的催化反应速率在内的反应速率方程外扩散内扩散内外扩散同时存在第二节  外扩散对反应速率的限制效应一、外扩散传质速率研究对象的简化理论模型Fick定律二、宏观反应速率的求解外表面扩散速率（Fick定律）外表面反应速率动

5、力学控制外扩散控制求取过程引入无因次变量丹克莱尔准数★定义式物理意义Da>>1Da<<1三、外扩散有效因子动力学控制外扩散控制消除外扩散的方法对任意n级反应的有效因子n=1n=2四、外扩散限制与化学抑制同时存在非竞争性抑制底物抑制1、非竞争性抑制负协同效应2、底物抑制稳态操作点非稳态操作点第三节扩散对反应速率的限制效应问题的引出内扩散过程的特点一、载体的结构参数外表面积AP、比表面积Sg平均微孔半径颗粒体积VP、孔隙体积Vg孔隙率颗粒真实密度颗粒表观密度颗粒堆积密度微孔内的扩散机理以浓度差为推动力Knudson扩散分子扩散（Fick定律）有效分子扩散系数De二、微孔内的浓度分布（球状固定

6、化酶）简化假设载体和酶均匀分布等温、等De不考虑酶的失活扩散传质浓度是半径的函数S流入速率－S流出速率＝S消耗速率解与rs有关1、M-M方程无解析解，只有数值解2、一级反应方程的解常数的求解颗粒内底物浓度分布函数3、零级反应临界半径Rc最大颗粒半径Rmax三、微孔内的浓度分布（膜状固定化酶）理论模型（单面扩散）输入－输出＝消耗1、米氏方程2、一级反应3、零级反应临界厚度最大厚度梯勒模数Φ定义式物理意义动力学控制内扩散控制四、内扩散有效因子1、球形固定化酶一级反应零级反应2、膜状固定化酶单面扩散双面扩散五、影响内扩散效应的因素一级反应的梯勒模数通式第四节内外扩散同时存在时的限制效应一级不可

7、逆反应一、总有效因子实际反应速率/本征反应速率总有效因子的推导传质速率＝以外表面底物浓度为基准的反应速率以外表面底物浓度为基准的反应速率＝以主体溶液底物浓度为基准的反应速率引入Biot准数第五节生物膜和菌丝团的扩散反应模型1、生物膜的扩散反应模型生物膜的厚度生物膜扩散-反应模型假设生物膜内为单一菌种单一限制性底物生物膜拟稳态薄的平板生物膜生物膜内细胞相同2、菌丝团的扩散反应模型丝状菌内外传递速率的影响第六节扩散影响下的表