《微生物源酶制剂中抗菌活性的测定》编制说明

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1、《食品安全国家标准微生物源酶制剂抗菌活性的测定》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况原卫生部（现国家卫生计生委）于2011年7月委托原中国疾病预防控制中心营养与食品安全所（现国家食品安全风险评估中心）制定《食品安全国家标准微生物源酶制剂抗菌活性的检测》。中心随即成立了以李凤琴、韩小敏、李玉伟、张靖、张宏伟、韩春卉、赵熙等为主要起草人的工作组。工作组于2011年底完成了国内外相关标准、文献检索，行业现状调研等工作；在完成该标准实验设计的基础上，于2012年2月至2012年12月，工作组参考了FAO/WHO食品添加剂联合专家委员（JECFA）编著的《食品添加剂规范纲要第1卷》（Comp

2、endiunoffoodadditivespecificationVolume1）附录A的抗菌活性检验方法，确定以金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC6538、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)ATCC11229、腊样芽胞杆菌(Bacilluscereus)ATCC2、环状芽胞杆菌(Bacilluscirculans)ATCC4516、化脓性链球菌（Streptococcuspyrogenes）ATCC12344和粘质沙雷菌（Serratiamsrcescens）ATCC14041等6株标准菌株为试验菌株，完成了纸片规格、培养基种类、菌液浓度、环丙

3、沙星阳性对照物浓度等对抗菌活性主要影响因素的考察，并用建立的方法测定了部分市售酶制剂；2013年3月前完成了《食品安全国家标准微生物源酶制剂抗菌活性的检测》初稿；于2013年4月至2013年12月组织3家国家及省级检测单位对方法进行验证及市售酶制剂盲样的测定。2014年5月形成标准征求意见稿。二、标准的重要内容及主要修改情况《食品安全国家标准微生物源酶制剂抗菌活性的检测》（征求意见稿）参考了FAO/WHO食品添加剂联合专家委员（JECFA）《食品添加剂规范纲要第1卷》（CompendiunoffoodadditivespecificationVolume1）附录A抗菌活性检验方法的主要内容

4、，在我国首次建立食品用酶制剂抗菌活性检测方法，该方法明确了使用的标准菌株、测试纸片的规格、使用的培养基、菌液浓度、阳性对照物及其浓度等，经3家检验单位验证，证明方法的检验步骤合理、简单，重复性好，具有较强的可操作性。与JECFA标准相比，增加了环丙沙星（5.0µg/片）作阳性对照物、菌液的稀释度要求及设备和材料要求；规定了检验程序以及培养基和试剂的制备方法等，使方法操作更加简便、合理，符合我国标准方法制定的要求。一、国内和国际标准情况（一）《食品安全国家标准食品工业用酶制剂》（GB25594-2010）规定，微生物来源的酶制剂不得检出抗菌活性，但该标准未提供对应的检测方法；（二）美国FDA

5、酶制剂通用准则规定来源于微生物的酶制剂不得含有抗菌素、毒素（肠毒素、真菌毒素等），如可能含有不确定的毒素或抗菌素，必须用适当的检测方法进行检测，并证明确实不存在具有生物学意义水平的毒素或抗菌素，但美国FDA的准则未提供合适的检测方法；（三）FAO/WHO食品添加剂联合专家委员（JECFA）编著的《食品添加剂规范纲要第1卷》（CompendiunoffoodadditivespecificationVolume1）附录A的抗菌活性检验方法，规定了检测用的微生物、培养基、纸片型号、酶制剂稀释比例等，并比较详细介绍了方法的操作程序。二、方法验证按计划组织中国食品药品检定研究院、北京市疾病预防控制

6、中心和山东大学公共卫生学院级及国家及省级单位对《食品安全国家标准微生物源酶制剂抗菌活性的检测》（征求意见稿）进行验证。（一）验证内容1.试验菌株金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC6538、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)ATCC11229、腊样芽胞杆菌(Bacilluscereus)ATCC2、环状芽胞杆菌(Bacilluscirculans)ATCC4516和粘质沙雷菌（Serratiamsrcescens）ATCC14041培养24h菌液1:10稀释液，化脓性链球菌（Streptococcuspyrogenes）ATCC12344培养24h

7、菌液1:20稀释液；2.培养基：TSA-北京陆桥和TSA-OXOLD；3.纸片：杭州2号和Whatman；4.环丙沙星：5.0μg/纸片；5.酶制剂Ⅰ和酶制剂Ⅱ。（二）验证结果经三家单位验证，结果表明：1.规定的试验菌株菌液稀释度可以满足试验要求，纸片含环丙沙星5.0μg/片时，显示良好的抗菌活性。2.经比较培养基TSA-北京陆桥和TSA–OXOLD，对环丙沙星5.0μg/片显示良好的抗菌活性，两种培养基无明显差别。3.