微生物源抗生素类次生代谢产物杀线虫活性测定 浸虫法征求意见稿编制说明

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1、《微生物源抗生素类次生代谢产物杀线虫活性测定浸虫法》国家标准编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会计划项目，项目编号为20181038-T-424。本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2019年完成。二、背景、目的和意义病原线虫是除真菌、细菌、病毒之外的重要病原物，在动物或人中有蛔虫、尖尾线虫、圆线虫、毛首线虫等，在植物中有根结线虫、包囊线虫、根腐线虫等。据估算，寄生线虫对我们畜牧业的损失每年达1500亿元，导致作物减产的经济损失达700亿元。人、畜线虫病的治疗主要是化学药物（如吡喹酮、硝硫氰胺、三氯苯唑等），植

2、物线虫病的防治主要是氨基甲酸酯类和有机磷等化学药物以及阿维菌素等生物源农药。由于食品安全标准越来越高，采用绿色环保型杀线剂防治食源性植物的线虫已成为大势所趋。作为典型的微生物次生代谢源杀线剂，阿维菌素目前仍是市场上防治线虫的主流产品之一。目前市售的阿维菌素系列农药有阿维菌素、伊维菌素和甲胺基阿维菌素苯甲酸盐等，但这难以满足市场上对于高效低毒杀线剂的需要。作为高效低毒杀线剂的重要来源，微生物次生代谢产物等微生物源杀线剂早已成为研究和开发的热点。然而，目前有关杀线剂活性检测的标准较少，限制了新的高效低毒杀线剂的研究和开发速度。目前，在国内涉及到的只有2个国家标准

3、和1个农业部标准，分别是GB/T17980.37-2000《农药田间药效试验准则(一)杀线虫剂防治根线虫病》，GB/T17980.38-2000《农药田间药效试验准则(一)杀线虫剂防治胞囊线虫病》，NY/T1833.1-2009《农药室内生物测定试验准则杀线虫剂第1部分:抑制植物病原线虫试验浸虫法》。这3个标准有下列不足之处：其一，只针对植物病原线虫的杀线剂的活性检测，未涵盖动物病原线虫的杀线剂的活性检测，对整个杀线剂行业的发展极为不利；其二，在国家标准层面仅有田间药效试验不利于杀线剂行业的发展，田间药效试验周期长，不仅无法对杀线剂的药效进行快速测定，不利于

4、目前生物源杀线剂的筛选和开发；其三，在这3个标准中杀线剂处理对象为病原线虫，不同病原虫体的不一致性会影响到对杀线剂药效的判断；其四，已有标准中采用触碰法来调查线虫是否死亡，具有很大的主观性和随机性，6且线虫有假死现象，所以单一以此方法来判断线虫是否死亡是不准确的，需要寻求更为准确的线虫死亡判断方法，而在最新的一些研究中有采用染色法来判别线虫死亡，该方法简单、快速、准确，适用于用来判断杀线剂的杀虫效果。综上所述，为了促进高效低毒生物源杀线剂的研究和开发，我们有必要制定新的杀线剂活性检测标准。三、标准制定原则严格按照GB1.1-2009《标准化工作导则第1部分：

5、标准的结构和编写规则》的要求，制定该项国家标准。四、标准的内容框架本标准主要内容包括范围、规范性引用文件、术语和定义、原理、仪器和设备、试剂和材料、操作步骤、结果计算和表述、精密度。五、主要工作过程主要起草单位中国计量大学开展的主要工作过程如下：1.2017年1月，组成了标准起草工作组，安排了工作进度。2.2017年1月至2017年3月，起草工作组查阅了国内和国外有关标准中关于此类方法的规定，调研了国内外有关杀线剂活性检测方法的情况，起草了标准讨论稿。3.2017年4月，标准起草工作组，对标准讨论稿进行了讨论，形成标准讨论稿第二稿。4.2017年5月，征求相

6、关专家对标准讨论稿的意见，形成第三稿。5.2017年3月至2018年5月，对目前有较多报到的杀线剂活性检测方法进行了方法学验证。6.2017年8月，召开标准研制推进会，对标准研制过程中的问题进行讨论，商讨解决方案。7.2017年12月，标准起草工作邀请中国标准化研究院专家对标准讨论稿提供意见，对标准撰写中的一些问题进行了修订，形成标准草案。8.2018年5月，本标准经国家标准化管理委员会批准，获得立项。9.2018年8月，完成标准征求意见稿和编制说明的初稿。10.2019年1月，完成三方论证，召开专家征求意见会，根据专家意见修改和完善征求意见稿。六、主要技术

7、内容说明在本标准制定过程中，截止目前根据研究的深入先后完成标准讨论稿第一稿、第二稿、6第三稿、第四稿、标准草案以及标准征求意见稿，标准内容不断完善，并趋于科学合理。根据需要，本标准的主要技术内容确定为：（一）前言部分。给出了标准的起草原则、归口单位、起草单位及主要起草人。（二）范围。给出了本标准的适用范围。（三）术语和定义。给出了本标准中用到的相关术语及其定义。（四）原理。将线虫浸入微生物源抗生素类次生代谢产物药剂中使线虫死亡，用中性红将线虫死细胞或组织染成在显微镜下可见的红色，通过染色情况判断次生代谢产物对线虫的致死情况，计算线虫的校正死亡率，根据校正死亡

8、率的几率值和药剂浓度对数的线性回归关系得到回归曲线，