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1、交叉配血知识讲座9/18/20211标本的采集及要求一血型二不规则抗体的筛选三交叉配血四9/18/20212一标本的采集及要求1.标本要新鲜:前三个月内病人输过血或已经妊娠,则配血试验使用的标本不得在这次输血的48小时前抽取,避免因回忆反应产生的抗体漏检。新近的输血或妊娠可以引起意外抗体的迅速出现,如果对病人的输血史或人身史不明,使用的标本必须是输血前48小时内抽取的。血量约为5ml。2.病人在使用右旋糖酐、pvp等治疗前抽取病人血液标本备用,以防止红细胞缗钱状凝集对试验结果的干扰。9/18/20213标本的采集及要求3.在24小时内输
2、了12单位血后,可以输注未经交叉配血的ABO、RH同型的血液,因为原始交叉配血用的血清已不能代表患者血清的情况。4.标本必须有正确的标签,要防止血样的稀释和溶血的产生,溶血的标本一般不能使用,因为血清中的游离血红蛋白可以掩盖在输血前实验中抗体反映引起的溶血。标本标签上的内容与血液申请单上的内容要一致。9/18/20214标本的采集及要求5.血清或血浆均可用于输血前检查,但使用血浆标本时,应注意排除纤维蛋白原的干扰,因为血浆有时有少许纤维蛋白凝块,容易导致凝集结果的判断。6.输血后所有的标本均应妥善保存于2-8℃冰箱中,至少一周。9/18
3、/20215二、血型1.红细胞悬液的配制用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要用大量生理盐水洗一次,其目的是通过洗涤可以去除红细胞表面的物质,如少量的血浆蛋白、已溶解红细胞的基质,他们有竞争抗体的作用,还有抗凝剂,他们有抗补体的作用。9/18/202162.红细胞悬液的常用浓度2%的红细胞悬液一般用于抗体效价的测定5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血试验、及抗球蛋白试验等大多数血型血清学试验10%的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲和力试验9/18/202173.离心力的标准不同规格离心机，力矩不同，统一离心转速，但没有统一离心力。离心转速换
4、算公式：RCF=1.118×10-5×(rpm)2×R(cm)将试管成30-45℃角拿在手上，细胞扣朝上，手腕轻轻用力，用液体去冲细胞扣，如果为阴性，则细胞成细沙状沿试管壁流下，如果为阳性，细胞成块状脱落细胞壁或成齿状沿试管壁留下。切不可用力使劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散，弱凝集则会误判为阴性。4.离心后结果观察注意事项9/18/202185.加样时先加血清再加红细胞，以避免漏加；抗体和抗原的比例一般为2：1。6.必须要做正反定型实验才能确定血型。7.正定型试验如果有条件可加做抗AB,可用来检测弱A和弱B,反定型一定要加做O细胞,可用
5、来发现不规则抗体。9/18/202198.盐水试验多采用立即离心法,正确的操作是红细胞悬液加到血清后立即离心并观察结果。反应时间过长而延误立即离心的时间对ABO血型系统的抗体检出影响较大。①如果在室温放置2分钟后离心,可能使3+-4+的凝集减弱为0+-1+,并伴有溶血现象。②如果在室温放置5分钟后离心,原有的凝集可能消失,并有溶血。9/18/202110③有的标本在延迟离心后,本来应有的凝集会变为既不凝集也不溶血,因而难以发现ABO血型的不配合。这多数发生在O型人的血清抗体与A型、B型或AB型红细胞反应的试验中,发生率为2%-3%。发生
6、上述的原因是反应强的抗A、抗B和抗原强度强的A、B抗原作用,补体C1在有Ca2+存在的条件下,固定到红细胞膜上,妨碍了红细胞的凝集,进一步可能引起溶血。解决的方法：A:血清与红细胞混合后立即离心。B:用血浆或灭活的血清做试验C:用EDTA盐水配制红细胞悬液,D:稀释血清9/18/2021119.正反定型不一致的原因一般正反定型结果不一致有技术原因也有受检红细胞或血清本身的的问题。■（1）技术和管理错误---ABO定型中产生异常结果主要原因标本和试剂搞错，造成假阳性或假阴性的结果。器材不洁产生假阳性结果。试剂污染或不足，产生假阳性或假阴性
7、的结果。离心过度或不足，产生假阳性或假阴性的结果。阳性反应产生溶血现象未能识别，导致假阴性结果。漏加试剂，产生假阴性结果。结果记录或判断错误，产生假阳性或假阴性结果。9/18/202112正反定型不一致的原因■（2）标准血清效价太低、亲和力不强。如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。■（3）红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。■（4）血清异常华通胶或血清蛋白异常引起串钱状形成，影响反定性结果。■（5）红细胞致敏在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集，产生假阳性结果。9/18/20211
8、3■（6）近期曾异型输血，使病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。■（7）疾病因素导致抗原减弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，检出困难。■（8）红细胞多凝集现象红细
