不同亚型转化生长因子β(TGF-β1、 TGF-β2、TGF-β3)对 前软骨干细胞增殖分化增值活动的影响

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1、不同亚型转化生长因子β(TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)对于前软骨干细胞增殖分化增值活动的影响摘要目的：前软骨干细胞作为一种组织工程学种子细胞被用于修复软骨损伤，近年来受到了越来越多的学者的关注。本文通过观察三种不同亚型的转化生长因子（TGF-β）：TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3对于前软骨干细胞（PSCs）细胞增殖分化活动以及细胞外基质合成的影响并加以比较为构建组织工程学软骨组织以修复软骨损伤，寻找一种理想的细胞因子。方法：通过免疫磁珠分选法得到经过筛选和纯化的PSCs细胞，使用含有浓度为10ng/ml的三种亚型的重组TGF-β培养基对PSCs进行培养。采用MTT法与B

2、rdU/PI双参法测不同组别PSCs培养后第0,3,6,9d细胞增殖及DNA合成水平，并采用rt-pcr法测定培养后第0，3，6，9天不同组别ColII,Aggrecan基因的表达情况。采用免疫组化法测定培养2周后各组细胞SOX9蛋白表达情况。结果：培养三天后与对照组相比使用TGF-β1干预组的活性明显下降（P<0.05）,而TGF-β2、3组增殖活性与对照组相比较无明改变（P>0.05）。6天后，与对照组相比较TGF-β1组细胞增值活性明显降低(（P<0.01），而TGF-β2、3组则显示了相反的结果，使用TGF-β2、3组细胞的增殖活性较对照组明显增前且TGF-β3组高于TGF-β2组

3、（P<0.05）。rt-pcr分析显示随着时间的延长，与空白对照组相比实验组A、B、CColII基因表达均呈上升趋势，然而使用TGF-β1与TGF-β3组Aggrecan的表达随时间延长而增加，但使用TGF-β2组Aggrecan的基因表达无明显改变。免疫组化显示与对照组相比，TGF-β1、TGF-β3组的SOX9蛋白合成高于对照组（P<0.05），而TGF-β2组与对照组相比无明显差异性（P>0.05）。结论：TGF-β1能抑制PSCs增殖活性，而TGF-β2和TGF-β3具有促进PSCs增殖的作用，TGF-β1与TGF-β3均能促进PSCs细胞分化，而TGF-β2对于分化的诱导作用不明

4、显。[关键词]前软骨干细胞，转化生长因子亚型，增殖与分化StudyoftheeffectofTransformingGrowthFactorBeta(TGFβ1,TGFβ2andTGFβ3)ontheactivitiesofproliferationanddifferentiationofprecartilaginousstemcells（PSCs）AbstractObjective：Precartilaginousstemcells（PSCs）asapromisingtissueengineeringseedcellstocurecartilageinjuryattachmoreandm

5、oreimportancesfromresearchersrecently.ToobservetheeffectofdifferentTGF-βisforms:TGF-β1,TGF-β2andTGF-β3ontheproliferationanddifferentionofprecartilaginousstemcells(PSCs)andcomparetheircapacitybetweeneachother，furthermoretofindanidealcytokinetoconstructtissueengineeringCartilagetorepairCartilagedefe

6、ct.Methods:obtainthePSCsbythewaysofImmun-Magneticactivatedcellsortingafterseperationandpurifcation. CulturePSCsinthemediumwiththeconcentrationof10ng/mlofdifferentTGF-βisfroms.ProliferationandDNAsynthesisofPScsinresponsetoTGF-βisoformswasexaminedbyMTSandBrdU/PIdouble-referencemethodatthetimeof0,3,6

7、,9dafterbecultured.ObservethelevelofthegensexpressionofColII,Aggrecanatthetimeof0,3,6,9dbymeansPT-PCRandexpresionofSOX9bymeansImmuno-histochemistryatthetimeof2wtostudytheeffectsofTGF-β1,TGF-β2andTGF-β3onchondroge