nacl和高温胁迫对转基因抗虫棉苗期毒蛋白表达影响

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1、ｙ９８８８０２独创性声明本人声明所呈交的论文是毳个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：薹・晒薅时间：砂／年‘月７日关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅

2、和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：差’岛避时间：弘ｎ辟ｚ月７日导师签名么ｌ够饬时间：］—ｑ６年占月夕日第一章文献综述１．１我国抗虫棉生产棉花是重要的经济作物，在世界范围内得到广泛的种植。长期以来。棉铃虫一直严重危害着棉花生产。上个世纪∞年代以来，棉铃虫在大部分棉区持续爆发：１９９２年我国北方棉区棉铃虫大爆发．皮棉减产１６０万担。造成的直接经济损失高

3、达５０亿元：１９９７年仅长江流域棉区减产ｌＯ万吨，黄河流域棉花减产１５２万吨。损失高达５０～１００亿元。世界其他国家的棉花生产近年也遭受着棉铃虫的严重危害：１９８３．１９８４年，棉铃虫造成了澳大利甄昆士兰州棉花减产２０ｅ以上：１９８６－１９８７年美国中南部棉区棉铃虫造成皮棉损失ｌＯ万吨：１９８７．１９８８年，印度主要棉区８０％的棉田没有棉铃：泰国棉花生产由于棉铃虫的影响．其种植面积曾经一度由１４．６万公顷锐减至３．Ｏ万公顷。长期以来．化学农药在对棉铃虫的控制上一直起着关键作用．但随着棉铃虫抗药性的增加

4、，以及随之产生的环境问题，使得世界各国越来越重视通过生物工程的手段培育转基因抗虫棉，来控制棉铃虫的危害。美国是最先培育出可在生产上利用转Ｂｔ基因抗虫棉的国家。经过人们的不断修饰和改造，Ｂｔ基因在棉花体内已经可以高水平的表达，产生一定量的６＋内毒素，这种Ｂｔ毒蛋白对棉铃虫等多种害虫具有很强的毒杀作用。目前美国已通过该方法获得了几十个适用于不同生态区种植的抗虫棉品种，并在生产上大规模推广种植。１９９６年美国抗虫棉的种植面积已超过１２００万亩，１９９７年种植转基因抗虫棉品种的面积已占美国棉田面积的１５％以上

5、。１９９２年，中国农业科学院首次人工合成了拥有自己知识产权的ＣｒｙｌＡ杀虫基因．并于１９９３年和山西省农业科学院、江苏省农业科学院合作，采用农杆菌介导法和外源基因胚珠直接注射法，获得了高抗棉铃虫的转基因抗虫棉株系。目前我国已有１０多个品种通过了国家或省市品种审定委员会审定，如ＧＫ－１、ＧＫ－１２。１９９８年，石家庄市农业科学院和中国农科院生物技术中心合作，向石远３２１棉花新品种中导入Ｂｔ＋ｃｐｌｌ双价抗虫棉基因，育成了我国第一个双价抗虫棉——ｓＧＫ３２ｌ双价抗虫棉。目前，我国已获得近５０个双价抗虫棉优

6、良品种（贾士荣等，２００１）。转基因抗虫棉的种植面积在我国迅速扩大，１９９８年全国的转基因抗虫棉种植面积不到ｌＯ万公顷，２０００年便迅速发展到近１００万公顷，２００２年则超过Ｔ２５０万公顷，其中国产抗虫棉的播种面积超过了５０万公顷（图ｌ－１）。转基因抗虫棉占整个棉诧种植面积的比例从１９９８年的２．２％发展到２０００年的２８％。我国２００２年Ｂｔ棉种植已达２５０－２６０万公顷，约占植棉总面积的６５％，在黄淮海棉区更是高达植棉面积的８１％，２００３年，在中国北方棉区，Ｂｔ棉种植面积接近植棉总面积的９０％（

7、Ｈｕａｎｇ等，２００３）。＾．Ｊ瓷，｛罩誓图１．１中闲转婿强挺虫懈的’Ｉ．啦雨协税１．２Ｂｔ抗虫棉的抗虫性及影响因素一般认为，转Ｂｔ基因棉花对鳞翅日害虫，如棉铃虫、红铃虫、玉米螟等具有良好的杀虫特性，但是其杀虫特性时空动态十分明显（赵建周等，１９９８：崔金杰，夏敬源，１９９９；Ｆｉｔｔ等，１９９４：Ｒｕｍｎｋｌ等，１９９４）。国内外对这一问题进行了全面和系统的研究．涉及到毒蛋白含量的测定、生物测定、田问调查等方法。有报道指出，在正常的生长条件下，抗虫棉在苗期对棉铃虫的抗性最高，高达１００％．但是其对棉

8、铃虫的抗性随着生育时期的推进而逐渐降低（Ｚｈａｎｇ和Ｔａｎｇ，２０００：Ａｄａｍｃｚｙｋ和Ｓｕｍｅｆｆｏｒｄ。２００１）。大致规律是生育中前期好于中后期，营养器官高于生殖器官，成熟健壮部位高于幼嫩部位和衰老部位。影响转Ｂｔ抗虫棉抗虫性的原因主要有以下几点：一是Ｂｔ毒蛋白在棉株体不同发育阶段、不同部位、不同器官的含量不同有关（夏敬源等。１９９９）；二是在不同生育时期，棉株体所处的不同环境条件，特别是逆境（干旱、淹水和低温等）环境中。Ｂｔ毒蛋白的表达量以及活