实验一微生物培养基的配制灭菌及纯培养

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1、实验一微生物培养基的配制和灭菌及纯培养一、微生物培养基的配制和灭菌（不做）目的要求实验材料实验程序1、目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。2、材料和器皿主要药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、营养琼脂等。仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、紫外线杀菌灯。其它：天平、药匙、电炉、1NHCl、1NNaOH、pH试纸、三角烧瓶、量筒、玻棒、试管、培养皿、吸管、牛皮纸、纱绳、硅胶塞、标签等。3、方法和步骤培养基的配制培养基和玻璃器材的灭菌方法

2、培养基的概念及种类培养基的配方、配制步骤（1）培养基的配制培养基是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。培养基的介绍碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水营养物质的浓度要适宜营养物质之间的配比要适宜培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。细菌：pH7.0~8.0放线菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻类：pH6.0~7.0原生动物：pH6.0~8.0初始pH通常培养条件：培养基的种类按照培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不

3、加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。琼脂是最优良的凝固剂，自1880年代开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。实验室的常用培养基：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；放线菌：高氏1号合成培养基培养；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基；培养基的配制配方、配料加热溶解调pH(略)过滤（略）分装(倒平板不分装）灭菌包扎(试管放在烧杯)摆斜面、倒平板贮存牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、

4、液体培养基2、固体培养基3、半固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方(P.78)：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化钠0.5g琼脂1.5g水100mLpH7.2~7.4灭菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固体培养基配方：琼脂0.3g牛肉膏蛋白胨液体培养基配方：琼脂0g牛肉膏蛋白胨营养琼脂：按照配方生产的牛肉膏蛋白胨培养基，属于固体培养基。今天固体培养基用营养琼脂。液体培养基和半固体培养基按照上述配方称量。配制步骤：P.78任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。常用的灭菌的

5、方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。P.90（2）培养基和玻璃器材的灭菌方法高压蒸气灭菌一般培养基:121.3℃,15-30min含糖培养基:112.6℃,15-30min培养基的灭菌器皿的灭菌：干热空气：160℃，2小时无菌室的消毒：紫外光化学药物熏蒸（苯酚；高锰酸钾+甲醛）二、微生物的纯培养（微生物的培养特征）1、实验目的1）掌握常用的分离

6、纯化微生物的基本操作技术：平板划线法；2）掌握微生物无菌操作技术；3）熟悉不同微生物在固体斜面、半固体和液体培养基上的生长特征。2、实验原理1）微生物在自然界中无处不在，尤其在土壤中存在极其丰富。但自然界中的微生物都以混杂状态存在。要研究某种微生物的性质，首先要获得这种微生物的纯培养物。2）在固体平板、固体斜面、半固体和液体培养基上，不同的微生物有其固有的培养特征。这些培养特征可以作为微生物分类鉴定的指标。今天接种的菌种：枯草杆菌芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运

7、动。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。大肠杆菌需氧及兼性厌氧。G－短杆菌，周鞭毛，有动力，周身有菌毛。变形杆菌为革兰氏染色阴性、无芽胞、无荚膜、周身鞭毛、运动活泼、两端钝圆的小杆菌。兼性厌氧。有些种在普通固体培养基上菌落呈迁徙生长。在自然界中存在极广，水、泥土、阴沟及各种腐败的动、植物中最多，也存在于健康人和动物的肠道中。它们是条件致病菌，在特殊情况下对人致病，如食物中毒、尿路感染、夏季腹泻或其他混合感染。葡萄球菌

8、是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。在液体培养基的幼期培养中，常常分散，细菌细胞单独存在。代表种有金黄色葡萄球菌（S-taphylococcusaureus）（黄色）、白色葡萄球菌（S．albus）（白色）、柠檬色葡萄球菌（S．citreus）（橙色）。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。在肉汤培养基中24小时后呈均匀混