动物细胞融合和单克隆抗体

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1、叶琴专题2细胞工程2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体学习目标:1.了解动物细胞融合的原理、过程和意义2.举例说出单克隆抗体制备的原理和应用重点：单克隆抗体的制备过程难点：单克隆抗体的制备过程2002年12月30日，两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术实例1：自然条件受精作用一.动物细胞融合1970年人工条件下的人-鼠细胞融合实验实例

2、2：人工诱导１动物细胞融合过程思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？2.概念：3.结果：杂交细胞4.原理：细胞膜的流动性6.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体7.应用：5.诱导方法：物理法;化学法和生物法活动1：请同学们快速阅读课本P52动物细胞融合也称________。是指_________动物细胞结合成一个细胞的过程。形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的____细胞，称为________。两个多个或单核细胞杂交处理方

3、法诱导手段结果原理二、单克隆抗体的制备1.图中是哪种免疫类型是？２.抗体由何种细胞产生？３.抗体主要分布在哪里？４.传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？温故知新浆细胞主要在血清体液免疫反复注射浆细胞抗原动物体内抗体产量低、纯度低,特异性差,反应不够灵敏活动２:阅读P５３找一找：科学家发现B淋巴细胞有什么特点？并讨论：怎样才能获得大量的单一抗体？体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖问题１：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的问题２：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备科学家发现：１.体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上２.每个B细胞只分泌一种特异性的抗体单克隆抗体克隆

4、一个B淋巴细胞细胞群抗体遗憾：癌细胞动物细胞融合一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂交细胞动物细胞培养１.实验原理：动物细胞融合单克隆抗体既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体1975年，米尔斯坦和柯勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖杂交瘤细胞模拟单克隆抗体的制备过程4人一组使用一套细胞模型，完成模拟制备流程。小组探究活动注射羊红细胞２.单克隆抗体的制备过程．．．．．．抗羊红细胞的单克隆抗体活动３：第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三

5、步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。实验评价已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠B淋巴细胞选择培养基必须经过克隆化培养和专一抗体检验阳性1.下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。小结[变式练习]２.如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：⑴若A、B是植物细胞，在细胞融合之前用处　　理，除去了；A、B到细胞C的过程中，常用的化学方法是用诱导．⑵若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株。⑶若A、B是动物细胞，一般用，使其分散开来，A、B到C的过程中，常用

6、的不同于植物细胞的诱导因素是，所形成的D称为。⑷若该过程是制备单克隆抗体，A为B淋巴细胞，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了。在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D细胞应该是。纤维素酶和果胶酶细胞壁聚乙二醇植物组织培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶灭活的病毒杂交细胞特定抗原３杂交瘤细胞小结B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC[自我评论]3、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的实验方案。2、该方案能达到预期效果吗？为什么？3、图中B为________过程，特有的诱导方法_________。该细胞继承___________的遗传特性，既能__________

7、,又能___________。1、该实验方案的目的是４、C过程指细胞培养此细胞的分裂方式___________。制备单克隆抗体动物细胞融合灭活的病毒双亲细胞产生专一抗体迅速大量增殖不能没有将抗原注小鼠体内,无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞有丝分裂小结课堂小结动物细胞融合动物细胞A动物细胞B动物细胞_____________法诱导培养物理化学生物杂交细胞（单核）膜融合质融合单克隆抗体筛选二杂交细胞等杂交瘤细胞体外或体内培养筛选一骨髓瘤细胞诱导融合