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1、银杏叶提取工艺一．实验仪器及试剂1.实验器材：电子分析天平，烘箱，粉碎机，分样筛(60目)，恒温水浴锅，分光光度计，真空干燥机2.玻璃仪器：棕色广口瓶，烧杯（1L），容量瓶（25mL）玻璃棒，温度计，普通漏斗，分液漏斗，布氏漏斗，具塞刻度比色管（10mL），移液枪，比色杯3.试剂：60%乙醇溶液(取640mL95%乙醇,360mL纯净水配成60%乙醇溶液)，石油醚，30%乙醇溶液，5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，1mol/L氢氧化钠溶液，芦丁粉4.装置：蒸馏装置，抽滤装置，萃取装置5.其他材料：纱布，银杏叶二．实验步骤
2、1.预备 取新鲜银杏叶，洗净，晾干，于70℃烘箱中烘9h(时间视样品水分含量定,可以8～12h)，取出置于干燥箱内冷却，用粉碎机粉碎过60目筛，粉末置于棕色广口瓶中存储。2.浸提 配制60%乙醇溶液(取640mL95%乙醇，360mL纯净水配成60%乙醇溶液)。取100g银杏叶粉于700mL60%乙醇中，在水浴锅内加热到60℃～70℃，浸提2h，每10min搅拌一次，用纱布过滤,残渣中加入60%乙醇700mL，60℃～70℃继续浸提2h，每10min搅拌一次,纱布过滤，合并浸提液。同时做平行实验。3.除脂类和叶绿素将滤液盛
3、于分液漏斗中，用石油醚萃取1~2次，每次石油醚用量约为滤液体积的1/25，直到水层不含叶绿素为止。4.抽滤 先用纱布粗滤,去除大颗粒沉淀,以提高抽滤速度。安装抽滤仪器,往布氏漏斗中加入少量浸提液进行抽滤,由于银杏叶中含有胶状沉淀物,滤纸易造成堵塞,导致抽滤速度下降,故应经常更换滤纸。抽滤结束后,取滤液弃滤渣。5.蒸馏、浓缩 安装蒸馏、浓缩仪器,抽滤液中含大量乙醇溶液,用蒸馏装置进行乙醇浓缩。一定量的乙醇也具有杀菌作用,在测定提取物抑菌作用时,应尽量排除乙醇溶剂的干扰,使乙醇完全挥发干净。为了不破坏提取物中有效成分,水浴温度
4、控制在60℃～70℃,而95%乙醇的沸点在75℃左右,故蒸馏速度慢,时间长。可采取简单的方法,直接水浴加热,在空气中挥发乙醇,此法缺点:不能回收乙醇。最终得到的提取物为一部分沉淀浸膏,颜色为深棕色粘稠物。6.干燥 由于浓缩的浸提液中仍含有部分乙醇和水分,采用真空干燥法,温度控制在60℃～70℃之间,利用增大真空度来降低沸点,去除最后的乙醇和残留的部分水分。如果条件允许还可以采用冰冻干燥法干燥。此时的提取物中除含有黄酮类和内酯外,还含有一定量的杂质。1.标准曲线的制作(1)芦丁标准溶液的配制:准确称取25mg芦丁粉,于25m
5、L容量瓶中,用30%乙醇溶液溶解并定容,得到浓度为1mg/mL的芦丁标准溶液.(2)取10mL的具塞刻度比色管6个,编号,按表1操作:表1操作过程瓶号123456芦丁标准溶液(mL)01234530%乙醇溶液(mL)5432105%NaNO2溶液(mL)0.30.30.30.30.30.3摇匀,放置5min10%Al(NO3)3溶液(mL)0.30.30.30.30.30.3摇匀,放置6min1mol/LNaOH溶液(mL)444444用30%乙醇溶液定容,摇匀定容后芦丁浓度(mg/mL)00.10.20.30.40.5定
6、容10min后,1号瓶调零,在510nm波长下测量其余各瓶的光吸收值(OD).然后以芦丁溶液浓度为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘出标准曲线.2.测定银杏叶提取物中黄酮类化合物的含量准确称取一定量(50mg左右)银杏叶提取物,于10mL容量瓶中用30%乙醇溶液溶解并定容.取该溶液1mL于25mL容量瓶中,按制作标准曲线中的方法,测其光吸收值.在标准曲线上查出该光吸收值所对应的芦丁浓度.用下式计算出银杏叶提取物中黄酮类化合物的百分含量.黄酮类化合物含量=标准曲线上查得的芦丁浓度(mg/mL)/提取物溶液的浓度(mg/mL)*10
7、0%3.单因素实验①溶剂的选择的影响溶剂甲醇（60%）乙醇（60%）水吸光度②浸提时间的影响时间/h0.51.01.52.02．5吸光度③浸提温度的影响温度℃5060708090吸光度④料液比的影响料液比1：31:41:51:61:7吸光度⑤浸提次数的影响浸提次数/次12345吸光度⑥PH值的影响PH56789吸光度1.正交实验①比色条件的正交实验A(5%NaNO2)B（10%Al(NO3)3C（4%NaOH）吸光度10.10.1220.20.2330.30.3440.40.4550.10.1260.20.2370.30.
8、3480.40.4590.10.12100.20.23110.30.34120.40.45130.10.12140.20.23150.30.34160.40.45IIIIIIIVR
