兽医生物制品的灭活剂、佐剂及保护剂

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1、第四章兽医生物制品的灭活剂、佐剂及保护剂云南农业大学动物科学技术学院孙永科博士【知识目标】熟悉兽医生物制品生产中常用的灭活剂、佐剂及保护剂;理解灭活剂、佐剂及保护剂在兽医生物制品生产中的作用;掌握灭活剂、佐剂、保护剂的概念;影响灭活剂作用的因素;影响保护剂效能的因素。了解佐剂的基本要求及类型;保护剂的组成、效能。【能力目标】能进行白油佐剂的乳化。第一节灭活与灭活剂为了提高兽医生物制品的安全性、防止散毒，许多疫苗通常通过灭活制成无毒力和无感染性的制品，灭活乃是兽医生物制品中的一项基本技术。一、灭活及灭活剂的概念灭活(inanimation)是指破坏微生物的生物学

2、活性、繁殖能力及致病性，但尽可能不影响其免疫原性，用以制备灭活疫苗。广义的灭活尚包含灭能(inactivation)，即使一些活性物质(微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等)丧失活力的过程。各种灭活疫苗、诊断抗原等的制造过程均属于灭活;血清经56℃加热30min处理，使补体丧失活性、破坏一些抑制因子的过程，以及破伤风毒素经甲醛处理后即失去致病性成为类毒素的过程均为灭能。用来灭活的药物称为灭活剂（inactivator），又称化学灭活剂。化学灭活是制备灭活苗最重要的手段。二、灭活的类型按照灭活作用的性质可将灭活分为物理灭活和化学灭活两类，尤以化学灭活法

3、效果确实、方法简便而最为常用。对不同的微生物、活性物质所采用的灭活方法、灭活剂也不尽相同。因此，选择合适的灭活剂和灭活方法对研制灭活兽医生物制品十分重要。(一)物理灭活一般常用热灭活、超声波灭活、紫外线灭活和7射线灭活等方法杀死微生物或消除其毒性。热灭活最早由Smith等研制猪霍乱灭活菌苗时提出，后来发现热灭活容易发生菌体蛋白质变性。过去用加热灭活方法者较多。该法简单易行，但加热杀死微生物的方法比较粗糙，容易造成菌体蛋白质变性，因而免疫原性受到明显影响。超卢波裂解细胞灭活应放在冰浴中间断进行。紫外线灭活效果不够好，曾发生过经紫外线灭活的强毒重新活化的例子。Y射

4、线灭活应根据被照射物的容量大小选择照射距离和照射强度。目前，除诊断抗原尚采用物理灭活(主要是热灭活)外，一般很少使用。(二)化学灭活利用化学药品或酶使微生物、活性物质的一些结构发生改变，从而丧失生命力、感染性、毒性或活性。化学灭活法是目前采用最多的灭活法，但化学灭活的效能常受灭活剂种类、剂量和作用温度、pH、时间等因素影响，因此必须筛选最佳的灭活条件。在特定条件下，物理灭活与化学灭活也可联合用于某些生物制品的灭活。三、常用灭活剂早在1911年，Lowenstein和Eisler就用甲醛处理破伤风毒素，使之脱毒而成类毒素。以后，Puntonii(1924)以0.

5、1%苯酚或0.1%甲醛处理制成犬瘟热灭活苗，Dorset等(1934,1936)用结晶紫灭活猪瘟病毒制成猪瘟结晶紫疫苗。至20世纪80年代，随着化学灭活剂研究的快速发展，已筛选出不少效果优良的灭活剂。(一)甲醛我国卫生部1979年颁发的《生物制品规程》中所列的灭活疫苗共16种，其中用甲醛灭活的疫苗占81％；农牧渔业部1984年发布的《兽医生物制品制造及检验规程》中的20种灭活疫苗，以甲醛灭活者达17种，占85％。农业部2000年发布的《兽医生物制品制造及检验规程》中的26种灭活疫苗，均以甲醛作为灭活剂。甲醛的灭活机制是还原作用，低浓度时能破坏微生物的生命链，从

6、而丧失活力或毒性而保存抗原性;高浓度时与微生物蛋自质(含酶蛋自)的氨基结合形成另一种化合物，从而破坏、杀死微生物。(一)甲醛甲醛用于疫苗灭活的浓度为0.1％～0.8%。一般需氧细菌用0.1％～0.2%的浓度，厌氧菌则多用0.4％～0.5％的甲醛杀菌或脱毒。37～39℃处理24h以上，有的需要更长时间。例如猪肺疫灭活苗，用0.1%的甲醛溶液，37～38℃灭活7～12h；气肿疽灭活苗，用0.5％的甲醛液，37～38℃灭活72～96h而破伤风类毒素用0.4%甲醛液，37～38℃灭活21～23d。甲醛用于病毒灭活其浓度可在0.05%～0.4％，大部分使用0.1％～0.

7、3％。不论是杀菌或脱毒，使用甲醛或其他灭活剂，灭活剂的浓度及处理时间都要根据实验的结果来确定。通常以用量小(浓度低)、杀菌处理时间短而又能达到彻底灭活目的为原则。为了中止在灭活结束后的作用，要用焦亚硫酸钠阻断。(二)苯酚苯酚(Phenol)又称石炭酸(Carbolicacid)，为无色结晶或白色熔块，有特殊气味，有毒及腐蚀性，易潮解，溶于水及有机溶剂。置于空气中和阳光下易被氧化变红，在碱性条件下更易促进这种变化，所以应避光保存。苯酚的灭活机制是使微生物蛋白质变性和抑制特异酶系统的活性(如脱氨酶、氧化酶等)，从而导致微生物死亡。生物制品的常用量为0.3%～0.5

8、%。(三)β-丙内酯β-丙内酯(β-P