绵羊角蛋白关联蛋白8_2基因克隆与表达分析_张立春

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1、中国畜牧兽医２０１５，４２（１２）：３１４０－３１４５ＣｈｉｎａＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１－７２３６．２０１５．１２．００５绵羊角蛋白关联蛋白８．２基因克隆与表达分析张立春１，曹阳１，孙福亮２，尹峰３，朴庆林１，王晓阳１，金海国１＊，张明新１＊（１．吉林省农业科学院畜牧科学分院，公主岭１３６１００；２．延边大学农学院，延吉１３３００２；３．吉林农业大学动物科技学院，长春２５２０５９）摘要：本研究旨在克隆绵羊角蛋白关联蛋白８．２（ｋｅｒａｔｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＫＡＰ８．２）基因ｍＲＮ

2、Ａ并分析该基因在不同组织器官的表达分布。首先提取小尾寒羊与新吉细毛羊皮肤及不同组织总ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆ＫＡＰ８．２基因并进行两个品种间的比较分析，实时荧光定量ＰＣＲ方法分析两个品种间ＫＡＰ８．２基因的表达谱差异。结果表明已成功克隆出绵羊ＫＡＰ８．２基因ｍＲＮＡ，该片段长５７４ｂｐ，其中ＯＲＦ区１９２ｂｐ，编码６３个氨基酸，甘氨酸（Ｇｌｙ）和酪氨酸（Ｔｙｒ）含量依次为２３．８％和２０．６％，属于典型的ＨＧＴ－ＫＡＰ家族。多态性分析显示新吉细毛羊与小尾寒羊ＫＡＰ８．２基因间存在丰富的多态性，多态位点多位于ＣＤＳ区两侧，其中小尾寒羊ＫＡＰ８．２基因３′ＵＴＲ区ｃ１９２＋１９－３９出现一个

3、疑似ｆｒｕ－ｌｅｔ－７ｊ的作用靶位。不同组织表达谱分析显示该基因为多组织表达基因，但两个品种羊不同组织表达谱存在较大差异，表现为小尾寒羊在脾脏、肝脏和皮肤中高表达，而新吉细毛羊则在皮肤和心脏中高表达。本研究提示小尾寒羊与新吉细毛羊ＫＡＰ８．２基因在基因多态性还是组织表达分布上存在显著差异，提示该基因与毛表型性状相关。关键词：ＫＡＰ８．２基因；新吉细毛羊；小尾寒羊；基因克隆中图分类号：Ｑ７８６文献标志码：Ａ文章编号：１６７１－７２３６（２０１５）１２－３１４０－０６ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰａｔｔｅｒｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＫＡＰ８．２ＧｅｎｅｉｎＳｈｅｅｐ１，ＣＡＯＹａｎｇ１，

4、ＳＵＮＦｕ－ｌｉａｎｇ２，ＹＩＮＦｅｎｇ３，ＰＩＡＯＱｉｎｇ－ｌｉｎ１，ＺＨＡＮＧＬｉ－ｃｈｕｎ１，ＪＩＮＨａｉ－ｇｕｏ１＊，ＺＨＡＮＧＭｉｎｇ－ｘｉｎ１＊ＷＡＮＧＸｉａｏ－ｙａｎｇ（１．ＢｒａｎｃｈｏｆＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ，ＪｉｌｉｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｇｏｎｇｚｈｕｌｉｎｇ１３６１００，Ｃｈｉｎａ；２．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＹａｎｂｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｊｉ１３３００２，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉｎｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

5、，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ２５２０５９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｏｂｊｅｃｔｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｃｌｏｎｅｔｈｅＫｅｒａｔｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ８．２（ＫＡＰ８．２）ｇｅｎｅｆｒｏｍＳｍａｌｌ－ｔａｉｌＨａｎｓｈｅｅｐａｎｄＸｉｎｊｉＦｉｎｅ－ｗｏｏｌｓｈｅｅｐａｎｄｔｅｓｔｔｈｅｔｉｓｓｕｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｔｏｔａｌＲＮＡｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓｆｉｒｓｔｌｙ，ａｎｄＫＡＰ８．２ｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ．Ｉｎｔｈｅｅｎｄ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎ

6、ｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｏｆＫＡＰ８．２ｇｅｎｅｉｎＳｍａｌｌ－ｔａｉｌＨａｎｓｈｅｅｐａｎｄＸｉｎｊｉＦｉｎｅ－ｗｏｏｌｓｈｅｅｐｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＱＲＴ－ＰＣＲ．ＴｈｅｃｌｏｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＫＡＰ８．２ｇｅｎｅｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄ，ａｎｄｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＫＡＰ８．２ｍＲＮＡｗａｓ５７４ｂｐ，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａ１９２ｂｐＯＲＦｗｈｉｃｈｅｎｃｏｄｅｄａｐｒｏｔｅｉｎｏｆ６３ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＴｈｅｓｅＫＡＰ８．２ｇｅｎｅｂｅｌｏｎｇｅｄｔｈｅｔｙｐｉｃａｌＨＧＴ－ＫＡＰｆａｍｉｌｙｂｅｃａｕｓｅｔｈｅｒａｔｅｏｆｇｌｙｃｉ

7、ｎｅａｎｄｔｙｒｏｓｉｎｅｗｅｒｅ２３．８％ａｎｄ２０．６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｏｍｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎＫＡＰ８．２ｇｅｎｅａｎｄａｌｍｏｓｔＳＮＰｓｌｏｃａｔｅｄｏｎｂｏｔｈｓｉｄｅｓｏｆＣＤＳｒｅｇｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｇｉｏｎｗｈｉｃｈｌｏｃａｔｅｄｏｎｔｈｅ３′ＵＴＲｃ１９２＋１９－３９ｏｆＫＡＰ８．