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《用荧光原位杂交_FISH_方法研究人类卵巢癌和胃癌细胞系17号染色体拷贝数变化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第11卷第1期肿瘤研究与临床Vol.11,No.11999年2月CANCERRESEARCHANDCLINICFebruary1999·论著·用荧光原位杂交(FISH)方法研究人类卵巢癌和胃癌细胞系17号染色体拷贝数变化郑淑芳乔惠珍郭美君路桂荣冯莉雅宁涛吕有勇柯杨摘要目的研究载有多种癌变相关基因的17号染色体在不同器官、不同组织类型肿瘤单个细胞内拷贝数的变化规律。方法以正常外周血淋巴细胞为对照,采用FISH方法检测各细胞株17号染色体拷贝数。结果17号染色体在各细胞株单个细胞中拷贝数表现为:SKOV3以六倍体为主,占48
2、%,七倍体率占23%;3AO以三倍体为主,占93%;OV2以四倍体为主,占67%;MGC803以六倍体为主,占64%;BGC823以二倍体为主,占83%;SGC7901以三倍体为主,占80%;PAMC82以五倍体为主,占78%。结论各细胞系均无17号染色体缺失,反呈扩增趋势。关键词卵巢癌胃癌细胞株FISH17号染色体《中国图书资料分类法》分类号R730-231-3R73517号染色体上含有多个已知及未知癌基因和箱内孵育72h。收获前2h加浓度为10mg/L秋水抑癌基因,染色体DNA定量分析发现在肿瘤细胞仙素20L,常规
3、制片。肿瘤细胞株于含小牛血清株中17p或17q的杂合缺失率(LOH)较高,但对卵10%的1640培养基中培养,肿瘤细胞的低渗条件为巢癌、胃癌细胞株17号染色体的拷贝数分析未见报0.075mol的KCl10mL,37℃水浴作用45min。各道。我们在卵巢癌、胃癌的7个细胞株中以FISH方细胞株的秋水仙素用量及作用时间见表1,余操作法检测了17号染色体拷贝数变化,目的是观察该染同外周血。色体的拷贝数,为进一步使用17号染色体上特定基表1细胞株的秋水仙素用量及作用时间因探针检测,以了解和比较不同组织学类型单个肿细胞株秋水仙素终
4、浓度作用时间低渗时间mg/Lhmin瘤细胞17号染色体变化规律及特点打下基础。SKOV30.034451材料与方法3AO0.03445OV20.0355451.1材料BGC8230.024451.1.1细胞株:卵巢癌细胞株SKOV3、OV2、3AOMGC8030.02845购自上海中科院细胞库。胃癌细胞株MGC803、SGC79010.04445PAMC820.04445BGC823、SGC7901、PAMC82、正常人外周血[3～5]1.2.2FISH分析(NBLC)由北京市肿瘤防治研究所提供。1.2.2.1杂交:总体
5、积为15L。探针准备:17号染1.1.2探针:17号染色体着丝粒探针购自美国色体探针1.5L,鱼精DNA1.5L,杂交液VIONCO公司。(ONCO公司)12L混匀。72℃变性10min,水浴备1.2方法用。样本变性:将片龄一周的玻片置于70%、80%、1.2.1血淋巴细胞和细胞株培养及其染色体和间[1～3]100%的系列乙醇(ETOH)中脱水,各5min,凉干。期核制备。取正常人肝素抗凝的新鲜外周血再置其于预温的70%甲酰胺(DF)/2×SSC中(pH0.2mL,在无菌条件下置入5mL含20%小牛血清=7),
6、变性3min,-20℃的70%、80%、100%ETOH的1640培养基中,在37℃的CO2浓度为5%的培养中2min×3脱水并终止变性,凉干。杂交:将变性的探针加于玻片上,加盖玻片后,用胶封好,即刻放入课题受国家自然科学基金及“863”国家重点攻关项目资金资助37℃预温的湿盒,37℃过夜。作者单位:北京市肿瘤防治研究所100034北京市西城区大红罗厂街1号(郑淑芳、路桂荣、冯莉雅、宁涛、吕有勇、柯杨);内1.2.2.2洗脱及荧光放大:取出杂交的玻片先去封蒙古医学院第一附属医院010000呼和浩特市新华大街34号(乔胶,
7、放入72℃预温的2×SSC(pH=7)中5min,移惠珍、郭美君)入1×PBD中洗2min,加100L封闭液Blocking,·3·第11卷第1期肿瘤研究与临床1999年2月加盖片放入温盒37℃温浴10min,去盖片吸印掉多瘤染色体研究中17号染色体缺失现象较为普遍,最余的液体,加50LFITC-avidin(Biotin-FITCDe-近微卫星检测技术的广泛应用,发现17号染色体上[4,8,9]tectionKitONCO公司)加盖片,放入温盒37℃30局部区域有较高的杂和缺失(LOH),这进一步min(自此步开始
8、避光),之后去盖片放入50mL的提示该染色体上尚存在多个未知的与肿瘤相关的抑SSC-T(0.1%Tween20/4×SSC)漂洗3min×3,再癌基因。在用每一种特定基因开展17号染色体研究加anti-avidin50L,加盖片,放入湿盒37℃30min之前,我们使用17号染色体着丝粒为探针检测了卵之后去盖片放入5
