向日葵染色体C-分带及其荧光原位杂交研究.pdf

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1、分类号S565.5学校代码10129UDC65.020.20学号08202036向日葵染色体C-分带及其荧光原位杂交研究ChromosomeC-bandsandfluorescenceinsituhybridizationinSunflower申请人：高猛学科门类：农学学科专业：作物遗传育种研究方向：作物遗传资源评价与种质创新指导教师：安玉麟研究员孙瑞芬研究员论文提交日期：二〇一一年五月摘要本研究以内葵杂3号三交种为材料，在已有的核型分析基础上，利用GiemsaC-分带技术建立了染色体C-带带型；采用同源序列法克隆了5SrDNA、18SrDNA基因片段并进行了序

2、列测定；利用荧光原位杂交（FISH）技术，将5SrDNA、18SrDNA和45SrDNA定位在染色体上。本研究为向日葵染色体识别及种间亲缘关系和染色体进化行为的研究提供了新的特异性分子标记。主要研究内容及结果如下：1.利用HKG(HCl-KOH-Giemsa)C-分带法对内葵杂3号三交种染色体进行了C-带分析，结果表明：染色体组共有62条带纹，以中间带和着丝点带为主；带纹强弱差异明显，其中46条为强带，16条为弱带；每条染色体都表现出明显的带纹特征，带型公式为：+++++2n=2x=34=8I++3T++5I+IT++4C+2CI+4CI+3CI++IT+CT+

3、2CT+。C-带揭示了染色体上的异染色质区域。2.以内葵杂3号三交种基因组DNA为模板，通过PCR的方法扩增了18SrDNA和5SrDNA部分片段，将扩增片段克隆到pGEM-T-easy上，测得片段长度分别为1808bp和515bp。经BLAST分析，1808bp序列与GeneBank中公布的向日葵18SrRNA基因序列同源性达99%（登录号AF107577）；515bp序列与公布的向日葵5SrRNA基因序列同源性达94%（登录号DQ865267）。除此之外，2个序列分别与多种植物的18SrRNA和5SrRNA基因的部分序列有很高的相似性，相似性分别达98－99

4、%和91－99%，进一步证明了18S和5S核糖体基因在物种间高度保守。2个序列已提交NCBI并注册，登录号分别为HM638219，HM638217。3.以45SrDNA、18SrDNA和5SrDNA为探针，分别与内葵杂3号三交种染色体进行荧光原位杂交分析，结果表明：45SrDNA和18SrDNA均得到3对杂交信号且位点分布相同，分别位于第3对和第10对染色体及第2对随体染色体的短臂末端，其中18SrDNA在第3对和第10对染色体上的信号较强，在第2对染色体上的信号较弱；45SrDNA的3对杂交信号强弱基本一致；5SrDNA的信号位点共有2对，分布在第7对和第10

5、对染色体短臂端部，其中第7对染色体上的杂交信号较强，第10对染色体上杂交信号较弱。关键词：向日葵；染色体；C-分带；荧光原位杂交；5SrDNA；45SrDNA；18SrDNAChromosomeC-bandsandfluorescenceinsituhybridizationinsunflowerAbstractInthispaper,thetriplehybridof“InnerMongoliaHibridoilsunflower3”wasusedtoestablishC-bandskaryotypewithC-bandstechniquebasedonthe

6、previouskaryotypeanalyse.5SrDNAand18SrDNAfragmentswerealsoclonedfromsunflowerandtheirsequenceswasanalysed.The5SrDNA,18SrDNAand45SrDNAwerelocatedonchromosomeswiththefluorescenceinsituhybridizationtechnique.Majorresultsareasfollows:1.C-bandstechnique(HCl-KOH-Giemsa)wasusedtoestablishC-

7、bandskaryotypeforthetriplehybridof“InnerMongoliaHibridoilsunflower3.Theresultsshowedthat:Atotalof62C-bandsweredetected,withmiddleandtelomerebandsbeingpredominant;Thebandsshoweddifferentintensityofcolor:46werestrongandtheother16wereweak;EachchromosomeposseddistinguishedcharacteristicC

8、-bands.TheC-