油菜MAM1基因的克隆及表达产物在虫害控制上的功能研究

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1、分类号：Q3学号：2007111107230492J-7始。，学校代号：10512秘密☆年湖北大学硕士学位论文油菜MAMl基因的克隆及表达产物在虫害控制上的功能研究作者姓名：梅晓霞指导教师姓名、职称：曾庆韬教授刘胜毅研究员申请学位类别：理学硕士学科专业名称：遗传学研究方向：动物遗传论文提交日期：10年5月23日论文答辩日期：10年5月29日学位授予单位：湖北大学学位授予日期：年月日答辩委员会主席：周苤塞麴援Molecularcloningandtheresearchofexpressionproductsin

2、PestcontrolofMAMlgeneinBrassicaNapusAThesisSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：MeiXiaoxiaSupervisor：Prof．ZengQingtaoLiuShengyiHubeiUniversityWuhan，China1755005湖北大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特-另,JDil以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他

3、个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。论文作者虢撷臻日期：f口年么月／钼学位论文使用授权说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以允许采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存学位论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公开学位论文的部分或全部内容。(

4、保密论文在解密后遵守此规定)黥妻铱指导教师签名：降泖鼢日期：囟年石月修日日期：加co年∥月f莎日2j7三摘要甘蓝型油菜(BrassicanapusL．)是世界第三大、中国最重要的油料作物。但我国油菜单产量不高，究其原因虫害是制约农作物高产的重要因素，世界每年因虫害造成的损失约占农作物总产量的15％以上。化学农药的施用在减少虫害的同时引起一系列副作用，如提高成本、污染环境、诱导害虫产生抗药性、引起次要害虫的大发生等。而通过基因工程手段培育抗虫(吸虫)新品种(系)可从根本上解决问题，对哺乳动物和一些有益昆虫不产生

5、毒害作用，且不造成环境污染，具有广阔的应用前景。因此，研究甘蓝型油菜的虫害控制具有重要的战略意义。本文从硫代葡萄糖苷的主要降解产物异硫氰酸盐对害虫可能产生的吸引力着手，研究了蚜虫对转基因植株的觅食反应，为进一步开发做为“陷阱”植物的新品种奠定了基础。本研究首次克隆得到甘蓝型油菜MAMl基因的全长cDNA序列，并构建了植物过表达载体，转化拟南芥，测试了蚜虫对转基因拟南芥的觅食反应，从而确定MAMl基因在害虫控制上的生物学功能。主要结果如下：1．序列分析用基因组步移的方法克隆到了甘蓝型油菜中双九号的MAMl基因全

6、长cDNA。并将其命名为BnMAMl。对BnMAMl基因的序列分析表明，该cDNA丌放阅读框全长1518bp，编码506个氨基酸，与拟南芥MAMl基因(AtMAMl)cDNA相似性为84％，氨基酸相似性为80．3％，确定二者有很高的同源性。2．拟南芥的转化及筛选将BnMAMl基因克隆到植物过表达载体pCA23NS上，并转化拟南芥。得到了经卡那霉素(Kan)筛选后存活，并且PCR验证为阳性的34株转基因植株。3．接虫实验通过在连接转基因及野生型拟南芥的泡沫板上接种蚜虫来研究其对蚜虫的吸引力，从而确定MAMl基因

7、在虫害控制上的生物学功能。研究结果表明，在生长状态及其他所有条件一致的情况下，转基因植株对蚜虫有着更强的吸引力。4．RT-PCR检测用RT-PCR的方法检测了油菜不同组织中MAMl基因的表达情况，结果表明，MAMl基因是一个非组织特异性表达的基因，并且其在花和角果中的表达量最高。检测了野生型及转基因植株接虫前后的BnMAMl基因表达情况。结果表明，接虫后的转基因植株有着更高的BnMAMI表达量。5．接虫前后植株中硫代葡萄糖苷和异硫氰酸盐含量的检测为了确定蚜虫对转基因和野生型植株觅食反应的不同是否跟植株中硫代及

8、异硫氰酸盐含量的高低相关，我们还测试了接虫前后植株中硫代和异硫氰酸盐的含量，结果表明接虫后的植株中硫代葡萄糖苷和异硫氰酸盐含量均比接虫前高。关键词：油菜；MAMl基因；基因组步移；基因克隆：载体构建；接虫AbstractOilseedrape(BrassicanapusL．)，asthethirdbiggestoilcropintheworldandthemostimportantoneinChin