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《实时定量RT-PCR的原理及方法-阳成波》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、DOI:10.13431/j.cnki.immunol.j.20030182免疫学杂志第2《X)6月I01I犯ICLUvo.19O.JX)(515l19卷第期年UJOLneR,一文章编号]X(刃8防x(入刃3)03(s)01朽扬l。实时定量RTPC获的原理及方法,`,,,,阳成波印遇龙黄瑞林李铁军单计光唐志如,(中国科学院亚热带区域农业研究所湖南长沙410125).,、n1〔摘要〕实时定量RT代R广泛应用于定量检测RNA表达水平为基础研究分子药物学和生物技术研究提供了一种。、、,、。有力的方法该法具有易操作高通量敏感性高和特异
2、性强的特点随着新酶新探针和新仪器的发展而得到快速的发展、、n本文将对实时定量R-T代R的定量原理仪器应用探针种类的研究进展以及细胞因子宙创A表达水平检测上的应用作一。综述〔关键词1细胞因子;定量;实时定量R手代R〔中图分类号I7R巧.4〔文献标识码」A.·neiP】eand由odofera】teRTPCR洲姗加一,一,一,一,一,一YGChellgboYINYulongHUGilinUiTejunSHANiJ邵allgTANGhZiurNANAuR,,,(snI价晓ofl“lthCAc山龙m,of&以口刀邵加410125ian
3、)subotrPicagA流uer~~hCee~tilneiryu歇妇y一et仁Ab由mtC〕hTn~scecnq犯义deral,itPonCPR(-RTCP)R15iwdelofrhetquan断cationofsetadast,~~.vels。aCcaltoemoeiotechnosel21,ce耐州Aleandiirtlofrh明ihlecularmedine朗diblogy怂阳yaer朋yotpe长川叩ablof垃ghtorput,ceonneespeC币iceooevovii飞intnueiteluyll、es,肠吵
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5、6iatoneRalitme,veser西on州州俪oaciton~t,实qUan时定,。定l原理粼咒黑:嘿器戴e7黑笠-RTcPR,R)R是:CP所谓实时定量CP指在CPR指数扩增期间实时定量CPR的发明归功于2个重要的发现’’通过连续监测荧光信号的强弱来即时测定特异性产一是发现DNAI、q酶有5~3外切酶活性;二是利,。lj[Ruoee。e物的量并据此推断目的基因的初始量实时用荧光能量传递技术(,cscn050engyr代R技术较之以前的以终点法进行定量的cPR技transfer,FERT)囚构建了双标记寡核昔~酸探针,即
6、。,、。术具有无与伦比的优势首先它不仅操作简便快肠qMan探针随后相继出现了分子信标(Molecular,。,、,速高效而且具有很高的敏感性和特异性其次由块以{)scorpi和杂交探针(物biziatonprol〕es)osnosnidr,’’于是在封闭的体系中完成扩增并进行实时测定大虽然这些探针不依靠NDAaTq酶有5一3外切酶,,大降低了污染的可能性且无须在扩增后进行操活性但都利用了几RT原理最后又出现了能非特,一4。,,作〔〕目前它作为一个极有效的实验方法已被异的与双链DNA结合而发荧光的染料如sYBR,。,广泛地应用于
7、分子生物学研究的各个领域最近几G比enl在CPR过程中这些荧光信号可以被探测ea一~“”,二年不少学者应用RlitmeRTCPR来检测各种细胞器所即时捕获电脑软件可以通过等式△nR,+一,+一因子血RNA表达水平从分子水平来研究机体的免nRnR计算△瓜其中nR是表示每点测量的。,一。疫水平和免疫调控机制荧光强度nR表示荧光基线强度囚△nR的值表〔收稿日期」么刃2一11一18;〔修回日期」么刀3一05一伪“”〔墓金项目〕中国科学院百人计划资助项目阳成波(一,,,,。:;【作者简介」1978)男湖南衡阳市人博士主要从事动物营养与分
8、子生物学的研究eTl(价31)肠巧228Dmial:。ycb@isna.com二通讯作者16免疫学杂志第1卷,,。。示尸C尺过程中探针降解的量也即八了尺产物的量出荧光信号,,以△nR的值对循环数作曲线选择一个荧光阂值2Fa·t众ne常用的决lPCR仪荧光达到荧光阂值的循环数叫
