安徽地区猪传染性胸膜肺炎血清学调查与APP分离与生物学特性分析

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1、摘要猪传染性胸膜肺炎(Porcinecontagiouspleuropneumonia,PCP)，是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)引起的一种猪高度传染性呼吸道疾病，严重危害我国养猪业的健康发展。为了解安徽地区PCP的流行情况，提高APP亚临床感染的检出率和细菌分离率，并研究分离株的生物型特性，本试验将从以下几个方面开展。运用ApxIV-ELISA试剂盒检测1288份血清感染抗体，了解安徽地区总体感染情况及流行特点。结果显示，APP感染抗体总阳性率为26.40%（340/1288），猪场感染率为

2、78.37%(58/74)，母猪/后备母猪/公猪APP感染抗体阳性率（45.47%）高于哺乳仔猪（28.02%）、保育猪（6.16%）、育肥猪（7.20%）；夏季（41.42%）高于春季（29.75%）、秋季（26.35%）、冬季（19.26%），淮北地区（30.73%）和江淮地区（28.57%）高于皖南地区（13.77%），中型猪场（47.16%）高于大型猪场（19.28%）和小型猪场及散养户（23.15%）。安徽地区PCP的流行特点，为制定有效防控措施提供了科学依据。比较dsbE-PCR、omlA-PCR和ApxIVA-PCR的敏感性和特异性，并同

3、时运用三种PCR方法检测135份母猪鼻腔棉拭子中APP核酸，比较三种PCR方法的APP核2酸检出率。结果显示：三种PCR最低检测限度均为10CFU，且至对APP发生反应；dsbE-PCR方法的APP核酸检出率（23.7%）显著高于omlA-PCR（8.1%）和ApxIVA-PCR（14.8%），三者符合率较高，分别为84.4%、91.1%和93.3%。本试验为APP亚临床感染分子检测方法的改良提供参考。同时使用添加抗生素、NAD及血清的mPPLO、TSA、CA和BA四种选择性培养基分离135份母猪鼻腔棉拭子中APP，比较四种分离培养基的分离率。结果显示

4、：mPPLO的APP分离率（11.9%）显著高于TSA（0.7%）、CA（5.2%）和BA（2.2%），四者符合率较高，分别为88.9%、93.3%、90.37%、95.6%、98.5%和97.0%。本试验为猪鼻腔中APP分离方法的优化及培养基的选择提供理论参考。通过细菌学试验，研究APP分离株和参考株的生化特性。结果显示：分离株和参考菌株的细菌形态、生化特性以及生长曲线一致。G-，具有典型的多形性,菌体较小,多为球杆菌；与甘露醇、葡萄糖等反应为阳性，与乳糖、七叶苷等反应为阴性；2h~12h期间处于对数期，12h~14h达到最大值，14h后稍有下降并趋

5、于平稳。本试验结果为APP的细菌学检测、生化鉴定及疫苗制作提供参考依据。运用常规药敏纸片法，研究APP分离株药物敏感性。结果显示：安徽分离株对环丙沙星，氟苯尼考和诺氟沙星的敏感率最高（100%），其次是阿奇霉素和复方新诺明（85.7%），对丁胺卡那、青霉素等较敏感（71.4%~42.9%），对四环素、阿莫西I万方数据林、万古霉素和林可霉素耐药（0%）；福建分离株对环丙沙星和氨苄西林的敏感率最高（88.9%）；其次是诺氟沙星、卡那霉素和头孢唑林（77.8%），对青霉素、氟苯尼考等较敏感（66.7%~33.3%），对四环素、林可霉素和万古霉素耐药（0%）。

6、本试验为APP临床用药提供指导。通过辅酶试验，鉴定APP的生物型。结果显示：安徽分离株及参考菌株属于生物I型，福建分离株属于生物II型；运用ApaI-PFGE技术，对APP分离株及参考株进行基因型分型。结果显示：参考株和分离株共分为6种基因型，不同地区、相同地区不同猪场、相同猪场APP分离株间基因型均有差异，本试验为今后安徽地区APP筛选流行优势菌株及疫苗免疫菌株的选择垫定了基础。关键词：猪传染性胸膜肺炎；流行病学；检测；分离；基因型II万方数据AbstractPorcinecontagiouspleuropneumoniaisahighlyconta

7、giousrespiratorydiseaseofpigs,whichcausedbyActinobacilluspleuropneumoniae(APP).In1990,YangXufufirstconfirmedtheexistingofthediseaseinourcountry,hugeeconomiclosseswascausedtoourporkproduction.InordertoinvestigatetheprevalencePCP,toimprovethedetectionrateofsubclinicalAPPinfectiona

8、ndbacterialisolationrateofAPP,andtostudythebioc