《碱性磷酸酶Km值的》PPT课件

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1、碱性磷酸酶Km值的测定底物浓度酶浓度pH温度激活剂抑制剂※研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。影响酶促反应的因素底物浓度对反应速率影响在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。[S]V[S]：底物浓度V：不同[S]时的反应初速度Vmax：最大反应速度(maximumvelocity)Ｋm：米氏常数(Michaelisconstant)ＶVmax[S]Km+[S]＝──Km值①Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。②意义：a)Km是酶的特征性常数之一；b)Km可近似表示酶对底物的亲和力；c)同一酶

2、对于不同底物有不同的Km值。KmKm＝[S]2＝Km+[S]VmaxVmax[S]VmaxV[S]KmVmax/2双倒数作图法Vmax[S]Km+[S]V=（林－贝氏方程）+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]两边同取倒数Ｋm值与Ｖmax值的测定注意事项1底物和酶取样准确2保温时间准确1234567加入酶的时间加入碱性溶液终止反应的时间9:00:009:00:309:01:309:02:009:02:309:03:009:01:009:15:009:15:309:16:009:16:309:17:009:17:309:18:00保

3、证每个试管的反应时间为15分钟实验报告1绘制矩形双曲线图2绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶对磷酸本二钠的Km值注意事项1做如下表格2可电脑作图3若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数(1/2,1/16)4实验的最终目的是测得Km值，因此实验报告最终必须得出结论：Km值等于多少1234567Abs[S]1/ABS1/[S]