芍药苷对胶原诱导型关节炎大鼠外周血单个核细胞糖皮质激素受体的影响

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1、描述：研究芍药苷（paeoniflorin，PF）对胶原诱导型关节炎大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）糖皮质激素受体（GCR）的影响。采用胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型，初次免疫后第14天灌胃给予PF...[摘要] 研究芍药苷（paeoniflorin，PF）对胶原诱导型关节炎大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）糖皮质激素受体（GCR）的影响。采用胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型，初次免疫后第14天灌胃给予PF 25，50，100 mg·kg-1或雷公藤甲素20 μg·kg-1或PF 50 mg·kg-1+RU486 

2、15 mg·kg-1， 每天1次，连续给药28 d。末次给药后第2天，除PF+RU486组外所有实验大鼠摘眼球取血，处死并取所有大鼠未免疫关节，ELISA法检测PBMCs中GCRα，GCRβ表 达，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分析PBMCs中GCRα，GCRβ mRNA表达，免疫组化法分析关节滑膜组织IL-1β，NF-κB p65，TNF-α，PGE2的表达。PF 50，100 mg·kg-1可抑制CIA大鼠关节滑膜组织IL-1β，NF-κB p65，TNF-α，PGE2的表达（P<0.05，P<0.01），而R

3、U486 15 mg·kg-1可明显影响PF 50 mg·kg-1的这一作用（P<0.05）；PF 50，100 mg·kg-1可上调GCRα，GCRα mRNA的表达、下调GCRβ和GCRβ mRNA的表达（P<0.01），PF抑制CIA大鼠关节滑膜炎性介质可能与其调节GCR表达有关。 　　类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病，糖皮质激素（glucocorticoid，GC）具有强大的抗炎调节免疫功 能，是治疗本病的经典药物。芍药苷（paeoniflor

4、in，PF）是白芍总苷的主要药效成分，动物试验显示它能抑制关节炎模型炎性介质的表达。 课题组前期研究发现PF能提高胶原诱导型关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠内源性GC分泌水平。GC主要通过糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GCR）发挥生物学作用，本研究拟进一步观察PF对CIA大鼠外周血单个核细胞GCR及GCR mRNA的影响，同时观察GCR阻滞剂RU486对PF调节CIA关节炎症因子的影响，探讨PF抑制关节炎症因子是否与其调节GCR的表达有关。 　　1

5、 材料与方法 　　1.1 试剂和仪器 PF为中国食品药品检定研究院产品，纯度≥98%；地塞米松（Dexamethasone，DXM）片为广东三才石岐制药有限公司产品；雷公藤甲素 （triptolide，TP）为中国食品药品检定研究院产品，纯度≥98%；实验时均以5%羧甲纤维素钠配制成所需浓度。牛Ⅱ型胶原（bovine collagen type Ⅱ，CⅡ）和弗氏完全佐剂（complete freund′s adjuvant，CFA）购自美国Sigma公司；淋巴细胞分离液（北京生化试剂公司）；Trizol试剂为Invitro

6、gen公司产品；RNA 提取试剂盒为Biomed公司产品；逆转录聚合酶链式反应试剂盒为TransScript公司产品；GCRα，GCRβ ELISA检测试剂盒为美国R&D公司产品；IL-1β，NF-κB p65，TNF-α，PGE2免疫组化试剂盒为美国Sigma公司产品。Multiskan MK3型酶标仪为Thembo Fisher Labsystems公司产品。 　　1.2 动物分组和给药 健康Wistar大鼠70只，雄性，清洁级，体重140～180 g，由南昌大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（赣）2010-0

7、002。将大鼠随机分为7组，即正常对照组、CIA模型对照组、CIA+PF 25，50，100 mg·kg-1治疗组、CIA+TP 20 μg·kg-1治疗组及CIA+RU486（15 mg·kg-1）+PF（50 mg·kg-1）治疗组，每组10只。给药组大鼠于初次免疫后第14～42天灌胃给予PF，TP或RU486+PF，模型组和对照组给予相同体积的5%羧甲纤维素钠，每天灌服1次，连续28 d。 　　1.3 CIA大鼠模型的制备 将2 g·L-1的CⅡ（溶解于0.01 mol·L-1醋酸）加入等体积的CFA中，使得CⅡ终浓

8、度为1 g·L-1，低温条件下充分乳化。每只造模大鼠右足跖皮内注射100 μg CⅡ，7 d后在背部和尾根部皮下注射相同剂量的 CⅡ加强免疫1次。对照组相同方法注射等体积的生理盐水。 　　1.4 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells， PBMCs）的制备