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1、HPLC常见故障分析及日常保养知识Waters能引起HPLC发生问题的潜在因素:工作环境电源及地线流动相泵进样器保护柱在线过滤器连接管路色谱柱检测器数据处理装置操作逻辑判断及处理问题化学品环境仪器*色谱柱/保护柱*电源*泵*流动相*地线*进样器*样品*温度*检测器*湿度*数据处理单元*清洁程度从最简单,容易之处入手:如1.停止流速;2.去掉柱子;系统冲洗--去掉柱子和保护柱，用二通代替1.检查反压-应该为零或者很小;2.进空白-基线应无问题;3.检查基线状况;基线问题分析基线噪声流动相内含有空气-脱气处理检测池内有气泡–冲
2、洗检测池或增强检测出口背压（一般只适用UV检测器)色谱柱内有未洗脱尽的组份-洗脱色谱柱系统有漏液之处-检漏并处理电噪声-去除噪声源,信号线屏蔽,检查系统接地状况检测器光源灯能量低-更换光源灯检测池污染-冲洗检测池基线周期性噪声绝大多数情况下是来源于泵的问题泵头内有气泡-流动相脱气,泵头排气泵进出口阀有问题-更换单向阀组件柱塞杆有问题-更换柱塞杆及其密封圈溶剂混合不良-加装混合器电噪声-去除噪声源非周期性噪声气泡-流动相脱气检测池内有气泡-流动相脱气,检测池后加适当反压系统有漏液之处-检漏并处理溶剂混合不良-加装混合器电噪声
3、-去除噪声源基线漂移梯度系统-溶剂A于溶剂B的ABS值相差大-试用另种溶剂或使用基线扣除法色谱柱有其他组份被洗脱出-冲洗,直至基线稳定溶剂发生变化(如溶入气体或溶剂挥发)-氦气或脱气机脱气,溶剂瓶避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压)系统有漏液之处-检漏并处理环境温度影响(尤其对示差,电导,电化学检测)-室温,柱温,检测池温度控制环境湿度影对光检测器有较大影响反压变化-溶剂和样品过滤.注意黏度过大的样品基线周期性波动温度影响-环境温度及检测池温度控制.注意空调的影响溶剂混合不良-加装混合器流动相脱气不良-流动相脱气供电
4、电源的影响泵不良–检修泵基线有无规律的尖峰气泡-溶剂脱气电路接触不良-保证清洁,接线牢固,接点无氧化光源灯不良-检查处理电噪声-去除噪声源脱气方法在线脱气机脱气氦气脱气真空过滤脱气注意:溶剂应每天脱气无样品峰进样器未进样，样品瓶放置不正确或者未达到所需要样品量泵未工作，没有流速或者流速变小系统漏液流动相或样品的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题最简单快捷的检查-泵是否工作,系统是否漏液,进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应负峰组份的ABS值小于溶剂的ABS值气泡通过了检测池对RI检测
5、器不一定是有了问题，很可能是正常的所有峰都是负峰–软件设置或者是检测器输出与数据单元连线极性接反峰形不好-如峰拖尾,峰分叉,出肩膀在线过滤器(INLINEFILTER)污染(通常会伴随有系统压力升高之现象)色谱柱污染系统有不正常的死体积-检查管路连接是否正确-内径,接头保护柱(GUARDCOLUMN)污染溶剂不好或使用不对样品不好色谱柱坏了-*PH<2或>8会破坏柱子内的填料*流速变化率太大-操作上应注意在线过滤器装置保护色谱柱的其他技术在进样器与色谱柱之间的在线过滤器样品的过滤（不能防护密封圈的脱落物）通过固相提取（SP
6、E）净化样品干净的过滤芯脏的过滤芯，反压高保护柱污染大多数的色谱柱变差的原因都是污染使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命，使其>10,000次进样保护柱应当被认为是延长分析色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲保护柱的填料应该与分析色谱柱一致实际上，设计、装填良好的保护柱将改善分析色谱柱的分离效率色谱柱问题双峰前沿峰所有的峰都有变化色谱柱连接更换筛板再生或者更换色谱柱色谱柱被破坏pH<2,键合相水解pH>8,硅胶基质溶解色谱峰延展-系统死体积.009".020".040"样品谱带在管路内部扩散注意:较长的管路制造了更多的谱带展宽色谱
7、峰延展-系统死体积谱带展宽连接适当连接不妥由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽，机械问题连接不妥，造成漏液色谱柱安装及连接的机械因素色谱柱连接机械因素不恰当样品溶剂样品用甲醇溶解样品用流动相溶解（0.1%TFA。4%ACN以及5%MeOH在水中）进样体积过载500µL300µL100µL10µL进样体积对色谱峰形的影响样品质量过载6.25µginjected2Minutes分析规模上样量(6µg)获得良好的色谱峰形46Absorbance当上样量超过一定限度时发生–注意峰起点提前，注意：分析与制备之色谱峰的落点位于相同保留时间
8、Absorbance25mginjected制备规模上样量(25mg)产生质量过载的色谱峰形24Minutes6系统峰面积重现性RT重现性好,但峰面积重现性不好*进样量-选用定量环进样时,进样体积应大于3倍定量管容积;*样品,气泡;*样品在流动相各组份中不能充分溶解(通常伴随有柱压逐渐升高且经反冲后,柱
