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《联咪唑与亚氨基二乙酸配合物切割双链DNA研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、联咪唑与亚氨基二乙酸配合物切割双链DNA研究第10卷第1期太原师范学院(自然科学版)Vol?10No?12011年3月JOURNAl,OFTAIYUANNORMAI,UNIVERSITY(NaturalScienceEdition)Mar.201联咪唑与亚氨基二乙酸配合物切割双链DNA研究高晓丽薛华(太原师范学院化学系,山西太原030031)[摘要]以联咪唑为主要配体,混合亚氨基二乙酸改变PH后合成了ECuC1(H2biim)(H:O)]Fcu(Ida)C12?H()配合物,测定其晶体结构并用凝胶电泳的方法详细研究了它
2、对双链pBR322DNA的断裂作用.实验表明该铜(II)配合物在生理条件下协同抗坏血酸能够高效快速地切割DNA双螺旋链,动力学实验求得其在37℃,PH为7.10时的切割速率为2.67h.[关键词]联咪唑;铜配合物;Xray晶体衍射;凝胶电泳;DNA切割(文章编号]1672-2027(2011)01-0135-O4[中图分类号]0614[文献标识码)AU刖吾近年来,人工核酸酶在断裂核酸方面的发展,引起了分子生物学,生物技术和药物研究等领域的极大关注.国际上关于非酶断裂核酸骨架的工具,即特异识别和切割DNA的金属配合物及其
3、载体衍生物的研究,成为了生物化学研究领域中最为活跃的前沿课题之一n】.它们在作为DNA结构探针,表征DNA一蛋白质相互作用的足迹试剂,基因组合染色体作图和测序,治疗基因无序,开发新型疾病诊断,成像试剂以及设计特效治疗药物等方面都起着非常重要的作用.当前报道的断裂DNA试剂存在两个问题,一是反应机理大都为氧化还原作用,一是切割速率太慢,与限制性内切酶相差甚远.尽管人们对通过水解方式断裂核酸中磷酸酯键的切割剂进行了探讨,但其速率较低,使其应用受到了限制[5..本文所选用的联咪唑是一种重要的生物分子,咪唑残基存在于许多生物体
4、内大分子中,因而它在生物学上有非常广泛的用途...利用其作为主要配体,然后利用亚氨基二乙酸改变反应pH合成了不对称的双核铜(II)配合物,并通过实验证明其为一种高效的断裂DNA试剂.1实验部分1.1仪器与试剂Perkin～Elmer2400型元素分析仪,Shirnadiu—FTIR一8300红外仪(KBr压片),SMART1KCCDX—ray面探单晶衍射仪,Beckman@50pHmeter精密酸度计,DYYIlI32型电泳仪,TGI一l6B型高速台式离心机,SyngeneGeneGeniusBioImagingSys
5、tem凝胶电泳照相系统.质粒pBR322,三羟甲基氨基甲烷(Tris)购自华美生物工程公司,琼脂糖(Agarose)购自Promega公司,溴化乙啶(EB)购自Fluka公司,溴酚蓝购自上海试剂三厂,其他所用试剂均为市售分析纯或生化试剂.1.2配合物的合成与表征将0.3404g(2mmol/I)CuC1?2HzO溶于15mL去离子水中,搅拌下将0.1342g(1mmol/L)Hbiim加入其中,滴加少量0.1moi/LHC1,使溶液澄清.然后将溶于5mI去离子水中的0.1331g(1mmol/I)亚氨基二乙酸滴入溶液中
6、,加热回流1h,冷却过滤得到蓝色溶液,将滤液置于室温下,两个月后有蓝色晶体析出,取少量送样测晶体结构,其余用水洗涤,真空干燥.红外光谱(KBr)u(cm):3382.23205.4(N—H),1531.7l423.51108.2(ring)元素分析结果(理论值):C:24.365(24.054);N:14.005(14.030);H:3.071(3.034).收稿日期:201009—16作者简介:高晓丽(】980),女,山西盂县人,博士,讲师,太原师范学院化学系,主要从事无机化学研究136太原师范学院(自然科学版)第1
7、O卷1.3晶体结构测定一选取0.30mm×0.20mm×0.20mm的蓝色单晶,在带有石墨单色器的SMART1KCCDx-ray衍射仪上进行衍射测定E293K~.用Moka—ray(一0.71073A)和co扫描方式,在2.4.<<27.范围内收集到3388个衍射点,其中2826个I~2a(I)衍射数据用于结构分析.全部衍射数据经LP因子和经验吸收校正.晶体结构用直接法求得,全部非氢原子经Fourier合成和差值电子密度函数修正,氢原子坐标从差值电子函数并结合几何分析获得,非氢原子坐标,各项异性温度因子及各
8、项同性温度因子采用全矩阵最小二乘法进行修正至收敛.所有计算均在计算机上用SHELXL程序完成.1.4DNA切割反应条件DNA切割反应在含有10t~L所需不同pH的Tris缓冲液(10mmol/LTris,6.2mmmol/LNaC1)中进行,在反应液中加入适量pBR322DNA,适量的不同摩尔比的配合物溶液,37.C温育,用2L含
