《形态学实验技术》PPT课件

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1、形态学实验技术河北联合大学实验中心李琪佳组织切片制作技术石蜡切片常规染色技术石蜡切片特殊染色技术免疫组织（细胞）化学技术免疫细胞化学的理论基础免疫荧光细胞化学技术免疫酶细胞化学技术亲和免疫细胞化学技术重点介绍：电子显微镜技术（electronmicroscope,EM）1.透射电子显微镜2.扫描电子显微镜3.电镜技术与生物医学超微结构4.细胞超微结构与超微结构病理激光扫描共聚焦显微镜技术（ConfocalLaserScanningMicroscope）集高、精、尖细胞分析及工程技术于一体的新技术。该仪器突破了普通

2、光学显微镜不能对细胞或组织内部进行定位检测的限制，实现了对细胞内部光学断层扫描成像。可检测细胞内核酸、细胞骨架、细胞内pH、Ca离子浓度、膜电位、过氧化物、细胞间通讯、细胞筛选及定量等。为活细胞功能研究开辟了新途径，成为现代细胞生物学研究不可缺少的的工具。流式细胞仪技术（FlowMicrofluorimetry）是一种单细胞定量分析和分选的新技术。其范围包括了细胞表面或细胞内的各种抗原、蛋白、酶以及基因表达产物；还有细胞内的核酸定量或DNA倍体、细胞周期分析；尤其是癌基因的检测、血细胞表型分析、细胞分子和粘附分子

3、的检查、细胞凋亡分析、肿瘤相关抗原及单种细胞的纯化。第一章组织切片制作技术第一节概述组织切片的制作技术属于组织病理学范畴它是指采用包埋剂使组织内渗入某种支持物质，使组织保持一定的硬度，然后利用切片机切成薄片，经染色在显微镜下观察。根据支持物的不同，有石蜡切片、明胶切片、塑料切片、冷冻切片等类别。制成的切片捞置于载物网上，经烘干后可进行染色或备用。组织切片技术包括组织的取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色等。组织病理学标本大致可分为：手术标本、内镜取材标本、穿刺标本、细胞学标本第二节组织的处理取材固定脱水

4、透明浸蜡与包埋一、取材（tisssueprocessing）1材料新鲜：活检组织离体后立即固定，最迟不能高于30分钟。2取材部位及切面：纵切或横切往往是显示组织结构明晰的关键。掌握正确的取材部位就必须熟悉机体的组织结构和解剖特点，原则上应在病变与正常组织的交界处取材，避开坏死出血区。，甚至卷曲变形，特别是神经肌肉组织，可将其两端扎在木片或小木棍上进行固定。3.勿使组织受挤压：取材刀剪应锋利，切开时取材刀严禁来回挫动，以避免组织结构变形、细胞破碎。4.防止变形：固定后的组织或多或少会产生收缩现象5组织块力求小而薄：

5、切块的大小、厚度及质地决定了固定的效果，一般情况下，取材大小为2×1cm，厚度为2－4mm。二、固定（fixation）固定是将某些化学试剂（固定液）渗透到需要保存或制作切片的脏器或组织、细胞中，使其所含物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置。固定的目的：1.迅速防止组织细胞的死后变化,防止自溶与腐败使之尽量保持生前的形态结构。2.使细胞内的蛋白质、糖、脂肪、酶等成分变为不溶性物质，以保持其原有形态及特定位置。3.能将细胞的半液体状变成半固体状，使组织变硬以利切片。4.可使组织内的各种成分产生不同的折光率。5.

6、某些固定液可起助染作用而增进染色。固定方法浸泡固定注射、灌注固定微波固定蒸汽固定常用的固定剂单纯性固定剂：甲醛（福尔马林formalin）乙醇；乙酸。混合固定剂：中性甲醛pH7.0（甲醛、磷酸缓冲液）；A-F液（甲醛、酒精）三、脱水（dehydration）将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的过程脱水的目的标本经固定和水洗后，组织内有大量水份，不能与二甲苯混溶，因此必须脱水。常用的脱水剂和脱水方法脱水剂有：乙醇、丙酮等80％酒精30分钟95％酒精1－2小时95％酒精1－2小时100％酒精1－2小时100％酒精1

7、－2小时四、透明（clearing）为使石蜡能浸入组织块，组织脱水后必须经过一种既能与酒精相混合，又能溶解石蜡的溶剂，而达到石蜡浸入组织块的目的。此时因组织块的水分被二甲苯取代，其折射指数接近于组织蛋白的折光指数，组织块变得透亮。因此透明是石蜡包埋前的一个特定步骤。透明的目的：便于浸蜡、包埋。透明剂即能与脱水剂相混溶，又能与包埋剂（石蜡）相混溶，起到桥梁作用。大多数脱水剂不能和包埋剂（石蜡）混溶，故必须通过透明剂置换出脱水剂后才能进行后续程序。常用的透明剂二甲苯：为最常用的透明剂，有毒、易燃、易挥发；沸点1380

8、C-1400C,长期接触对粘膜有刺激作用。氯仿:易挥发微溶于水，易溶于醇、醚、苯等。它比二甲苯透明力差，但不宜使组织变脆，使大块组织的良好透明剂常用的透明方法二甲苯透明法（常用）：彻底脱水的组织块二甲苯1二甲苯2，此二步总的时间不超过40分钟。氯仿透明法：彻底脱水的组织块按3：1氯仿、纯酒精混合液1小时氯仿1-2小时1：1氯仿石蜡混合液1小时。五、浸蜡与包埋浸蜡(para